不同产地美味牛肝菌菌盖、菌柄的紫外光谱鉴别.docVIP

不同产地美味牛肝菌菌盖、菌柄的紫外光谱鉴别 　　摘要：建立采用紫外光谱技术快速鉴别不同产地美味牛肝菌（Boletus edulis）的方法，确定美味牛肝菌最佳提取溶剂和时间，制备测试液，应用紫外光谱技术建立7个不同产地美味牛肝菌菌盖和菌柄的紫外指纹图谱，光谱数据转化后进行聚类分析。结果显示，其最佳提取溶剂为氯仿，提取时间为30min；在10h内的稳定。性、方法重现。性和精密度的RSD分别在0.04%～1.73%、0.03%～0.63%、0～2.87%之间，表明该方法稳定可靠；菌盖、菌柄的紫外指纹图谱出峰位置相似，而峰高具有差异，表明不同产地美味牛肝菌化学组分相似，含量存在差异；聚类分析结果显示采自同一地区的美味牛肝菌能够很好聚类。研究表明，紫外光谱结合聚类分析能快速鉴别不同产地美味牛肝菌，可作为野生食用菌的鉴别和质量控制新方法。 　　关键词：紫外光谱；美味牛肝菌（Boletus edulis）；聚类分析；鉴别 　　中图分类号：TS201.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）09-2362-04 　　食药用菌是人类食物的重要来源，营养、保健价值独特，是较理想的健康食品之一。美味牛肝菌（Bofetus edulis Bull）又称大脚菇，其子实体富含蛋白质、维生素、氨基酸、多糖、矿质元素等，深受消费者的推崇，为著名食用山珍和药用真菌，是极具开发价值的药食同源型真菌。云南特殊的生境资源适宜多种野生菌生长，美味牛肝菌产量高，分布广泛。受地理、环境因素影响，不同产地美味牛肝菌化学成分、营养物质、药效等不尽相同。 　　传统的野生食用菌鉴别主要依据外观形貌，生长特性。显微结构，菌肉、菌管的颜色及变色反应等进行。同种食用菌在不同生长环境下出现大量表形变异，如美味牛肝菌菌盖颜色有褐色、黄褐色、红褐色或深褐色，菌管有乳白色、淡褐色。偶尔成黄绿色。其颜色变化较大：不同种类形态相似性大，不易准确鉴别。目前，对食用菌的鉴别分类的研究主要有红外光谱法和分子生物学方法，研究者利用傅里叶变换红外光谱（FTIR）法鉴别不同的灵芝产品；根据不同种类食用菌红外光谱的峰高、峰形的差异结合主成分分析、聚类分析等方法鉴别不同产地、不同种类食用菌，但这种方法需要丰富的经验，难以建立完整的鉴别体系。分子生物学技术的发展为真菌分类学注入了新的活力，改变和完善了真菌分类的一些概念，魏海龙等设计5对ITS引物并对ITS区段进行PCR扩增，实现牛肝菌属卷边组Boletus sect.Appendiculati物种的相互识别。Mello等根据ITS片段设计引物，对铜色牛肝菌（Boletus aereus Bull.）、美味牛肝菌等进行了分子鉴别：Lian等应用ITS设计引物辨别美味牛肝菌与其他蘑菇。分子生物学方法需具备一定学科知识背景，仪器操作复杂，价格昂贵，其推广运用具有较大局限性。 　　指纹图谱是运用现代仪器（光谱仪、色谱仪等）检测得到的能够基本反映成分较复杂物质内部特征的规范化图谱，具有操作简便、快速、整体性强等特点，是一种综合的质量控制或物种鉴别方法。指纹图谱不能代替成分含量测定，但所获得的信息比测定任何单一成分所提供的信息更丰富、更全面，是一种实现对样品多组分、多指标分析的理想方法。紫外指纹图谱技术根据不同物质体系紫外吸收图谱的出峰位置、峰高、峰面积等的差异，可用于鉴别不同物质体系：该项技术已被广泛应用于食品质量控制、中药材鉴别、酒类鉴别等多个领域。本研究采用紫外指纹图谱技术结合聚类分析对采自云南7个不同地区美味牛肝菌不同部位的紫外指纹图谱进行鉴别分析，为野生食用菌的鉴别分类提供辅助方法。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　美味牛肝菌样品：采于2011年7月，由云南农业大学刘鸿高教授鉴定，来源地见表1。 　　主要设备：UV-2550双通道紫外可见分光光度计（配有UVprobe工作站），日本岛津制作：K05200型超声波清洗机，昆明市超声仪器有限公司。 　　主要试剂：氯仿（分析纯），西陇化工股份有限公司：石油醚（分析纯），天津市风船化学试剂科技有限公司：氢氧化钠（分析纯），西陇化工股份有限公司；无水乙醇（分析纯），云南汕滇药业有限公司；蒸馏水，自制。 　　1.2 样品处理 　　样品采集后。清洗干净。50℃烘干。每个来源地取10个美味牛肝菌子实体，菌盖、菌柄分开粉碎，过100目筛。 　　1.3 美味牛肝菌特征成分提取条件确定 　　1.3.1 提取溶剂 以样品1为考察对象，确定最佳提取溶剂。准确称取0.1000g样品于25mL比色管中，分别加入10mL蒸馏水、无水乙醇、石油醚、氯仿、0.5mol/LNaOH，每组分别平行3次；超声波提取30min。过滤，以对应的溶剂为参比液，测定紫外光谱，根据吸收峰数确定提取溶