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不同炮制工艺对何首乌中成分含量的影响 　　摘 要：本文对不同炮制工艺对何首乌中成分含量的影响进行研究。固定相为：依利特hypersil BDS C18 色谱柱（4.6*250*5u），乙腈-甲醇-水（10：2：88）为流动相，检测波长为322nm；2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在5～95μg?mL-1范围内呈良好的线性关系。本法简便、重现性好、回收率高，可用于不同何首乌炮制品中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定。 　　关键词：何首乌；炮制；测定 　　何首乌为蓼科多年生缠绕藤本植物，又名野苗、桃柳藤、赤葛、九真藤、马肝石、九真藤芮草、蛇草、陈知白、、疮帚等。生首乌能解毒，消痈，润肠通便。制首乌功能补肝肾，益精血，乌须发，强筋骨。《滇南本草》记载：“涩精，坚肾气，止赤白便浊，缩小便，入血分，消痰毒。治赤白癜风，疮疥顽癣，皮肤瘙庠。截疟，治痰疟。”何首乌经炮制可减毒，炮制方法、时间对何首乌成分及肝毒性均有影响[1-5]。本文对不同炮制工艺对何首乌中成分含量的影响进行研究。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器：PURIST超纯水系统（上海瑞枫生物科技有限公司）；TGF-9075A电热恒温鼓风干燥箱（上海?赐伎蒲б瞧饔邢薰?司）；HX-06超声波清洗器（武汉恒信世纪科技有限公司）；德国美诺PG8583CD实验室清洗消毒机（科德恩（北京）科技发展有限公司）；LC2000液相色谱（天美（中国）科学仪器有限公司）；普利赛斯EP125SM电子天平（上海天美天平仪器有限公司）；PURELAB flex 系列纯水机（威立雅水处理技术（上海）有限公司）。 　　1.2 试药：乙腈（北京迈瑞达科技有限公司）、磷酸（天津谱祥科技有限公司）、三乙胺（淄博市临淄冰清精细化工厂）、甲醇（天津谱祥科技有限公司）、磷酸氢二铵（北京迈瑞达科技有限公司）、冰乙酸（北京迈瑞达科技有限公司）。 　　2 含量测定 　　2.1 色谱条件 　　依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为依利特hypersil BDS C18 色谱柱（4.6*250*5u）；乙腈-甲醇-水（10：2：88）为流动相；检测波长为322nm；流速1.0mL?min-1；柱温：30℃。理论板数按2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰计算应不得低于2000。 　　2.2 炮制品的制备 　　2.2.1 黑豆黄酒制。取何首乌倒入盆内，用黑豆汁与黄酒拌匀，置罐内或适宜容器内，密闭，坐水锅中，隔水炖至汁液吸尽，取出，晒干即得。黑豆汁的制法 取黑豆10kg，加水煮约4小时，熬汁约15kg，豆渣冉加水煮约3小时，熬汁约10kg，两次共熬汁约25kg。 　　2.2.2 蒸制。取何首乌，洗净，煮沸4-6小时，至中心至粘性，晒半干，切去茎基及尾梢，反复晒至发硬，再浸4小时后，加水盖过药面，煮沸8小时，焖1夜，晒半干，再蒸8小时，焖15小时。再如前法操作1次，趁热切9-12mm方块，晒干。 　　2.2.3 酒制。取何首乌片或块，用黄酒拌匀，润4-6小时，放笼屉内蒸6小时，取出稍晾，再加入锅内汁水，候汁吸尽，捞起再蒸，以蒸黑为度，取出晒干或烘干。 　　2.2.4 黑豆制。取何首乌片或块，用黑豆汁拌匀，置非铁质的适宜容器内，密闭，隔水加热或用蒸汽加热炖至汁液吸尽或取何首乌片或块。黑豆汁制法：取黑豆10kg，加水适量，约煮4小时，熬汁约15kg，豆渣再加水煮约3小时，敖汁约10kg，合并得黑豆汁约25kg。 　　2.3 供试品溶液的制备 　　取何首乌适量，粉碎成粗粉，精密称定至容量瓶内，加适量流动相超声20分钟，放凉，用流动相定容，过0.45μm的滤膜，即得。 　　2.4 对照品溶液的制备 　　精密称取2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品约10mg，置50毫升棕色容量瓶中，用流动相超声波振荡溶解并用水稀释至刻度，摇匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷20μg）。 　　2.5 标准曲线的制备 　　制备浓度为5μg?mL-1、15μg?mL-1、25μg?mL-1、35μg?mL-1、45μg?mL-1、55μg?mL-1、65μg?mL-1、75μg?mL-1、85μg?mL-1、95μg?mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品在5～95μg?mL-1范围内线性关系