东亚钳蝎毒素对人结肠癌细胞Caco―2的增殖抑制作用研究.docVIP

东亚钳蝎毒素对人结肠癌细胞Caco―2的增殖抑制作用研究 　　摘 要：为研究东亚钳蝎毒素对人结肠癌细胞Caco-2增殖的影响，以不同浓度的东亚钳蝎毒素（10、20、40 μg/mL）干预体外培养的Caco-2细胞，分别于24、48 h后，用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法，观察毒素对Caco-2细胞的增殖抑制作用，运用淋巴细胞转化试验和乳酸脱氢酶（LDH）释放试验检测蝎毒素对Caco-2细胞的作用途径。结果表明：东亚钳蝎毒素不仅能抑制Caco-2细胞的增殖而且能促进淋巴细胞转化，且毒素对Caco-2细胞增殖的抑制作用具有浓度和时间的依赖关系，随浓度加大和时间延长，对Caco-2细胞增殖的抑制作用增强。 　　关键词：Caco-2人结肠癌细胞；东亚钳蝎毒；细胞增殖；抗肿瘤 　　中图分类号：Q78文献标识号：A文章编号：1001-4942（2016）12-0136-06 　　Abstract The effects of Buthus martensii Karsch venom on proliferation of human colon adenocarcinoma cell line Caco-2 were investigated in this study. The test used different concentrations （10， 20， 40 μg/mL） of Buthus martensii Karsch venom to interfere the Caco-2 cells cultured in vitro for 24 and 48 hours， then the proliferation inhibition effects was observed by means of MTT assay. The mechanism of venom on Caco-2 cells was measured by lymphocyte transformation and lactate dehydrogenase release assays. The data indicated that Buthus martensii Karsch venom could inhibit the Caco-2 cell proliferation and promote the lymphocyte transformation. Besides， the inhibition effects were closely related to the treatment time and venom concentration， which enhanced with the extension of treatment time and increase of venom concentration. 　　Keywords Human colon adenocarcinoma cell line Caco-2； Buthus martensii Karsch； Cell proliferation； Antitumor 　　癌症已经成为威胁人类健康的第一杀手[1]，也是死亡率最高的疾病之一[2，3]，癌症的预防与治疗任务十分艰巨[4]。根据目前癌症的发病趋势，2020年全世界癌症发病率将比现在增加50%[5]。因此，找到并运用新的抗癌药物成为人类战胜癌症的关键。 　　现有研究表明，蝎毒对肿瘤细胞有直接杀伤作用，能有效地导致癌细胞凋亡[6]。蝎毒在抗肿瘤的同时还具有明显的调节和增强机体免疫力的作用，是一种理想的抗肿瘤药物[7-10]。目前，关于蝎毒抗肿瘤研究的报道很多，对蝎毒素的分离、纯化及药理作用等也进行了深入研究[11-16]。本研究就是在前人工作的基础上，以常见的东亚钳蝎（Buthus martensii Karsch）毒素作为研究材料，用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法，观察不同浓度东亚钳蝎毒素处理不同时间对Caco-2细胞的增殖抑制作用，同时通过淋巴细胞转化试验考察蝎毒是否具有免疫调节作用，通过LDH释放试验检测细胞受损程度，从而探讨该毒蝎毒素对Caco-2结肠癌细胞增殖的抑制作用途径，以丰富蝎目动物在毒理学和药理学等方面的理论内涵，为东亚钳蝎毒素的开发与利用提供理论基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　1.1.1 药品与试剂 东亚钳蝎毒素，由湖南农业大学动物研究室提取，-20℃长期保存，完全培养液溶解，细菌过滤器过滤灭菌，按试验要求加入完全培养液稀释至所需浓度。 　　青霉素和链霉素，华北制药股份有限公司产品；DMEM（高糖）培养基，Hyclone产品；0.1