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产丝素蛋白酶菌株发酵条件的优化 　　摘要 采用单因素法，研究了产丝素蛋白酶菌株在发酵过程中，培养温度，培养基初始pH值，培养基碳源、氮源、金属离子等因素对产丝素蛋白酶菌株的发酵影响，最后通过对发酵产生的产丝素蛋白酶酶活及丝素蛋白降解的影响分析，来初步确定最佳发酵条件。研究结果表明：培养温度30 ℃，培养基初始pH值8.0，培养基中添加丝素，以玉米粉作为碳源，KNO3为氮源，以Mg2+作为金属离子，在该条件下发酵所得丝素蛋白酶活性最高，降解程度最大。 　　关键词 产丝素蛋白酶；发酵条件；丝素蛋白降解；优化 　　中图分类号 O629.72 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）18-0242-02 　　Abstract By single test，choosing culture temperature，initial pH value，carbon sources，nitrogen sources，metal ion as the conditions，effect of the fermentation for fibroinase strain was studied. Then through the effect on the fibroinase activity and fibroin loss rate，the best conditions for fermentation was chose.The results showed that best fermentation conditions for fibroinase strain was as followed：the culture temperature 30 ℃，initial pH 8.0，corn powder as the carbon sources，KNO3 as the nitrogen sources，Mg2+ as the metal ion，and add some fibron.Under the condition，we can get the best fibroinase activity and fibroin loss rate. 　　Key words fibroinase；fermentation condition；fibroin loss rate；optimization 　　蚕丝是人类最早利用的天然蛋白质纤维之一。蚕丝中蛋白质含量高达98%以上，主要是由丝素蛋白和丝胶蛋白组成，其中，丝素蛋白是蚕丝蛋白的主要组成部分，其水解中间产物为丝肽，具有较好的调节血压、防止脑老化、降血糖及抑菌等功效[1]。当前，丝素蛋白水解可采用中性盐解法、酸碱水解法及酶解法等。其中，酶法水解制备丝素肽，因具备成本低、生产条件温和、高安全性、高选择性、高稳定性和可控性等优点而受到人们的青睐[2]。 　　在自然界中，存在着各种各样可以水解蛋白质的蛋白酶，但由于丝素蛋白是一种典型的β-角蛋白，很难被普通的蛋白酶降解。土壤中存在着丰富的微生物资源，目前认为环境中有90%以上的微生物还没有进行分离培养。蚕茧、丝绸在土壤中很快会腐烂、降解，这说明其中存在着可以降解、利用丝素蛋白的微生物。 　　本文主要针对土壤中分离筛选出可降解丝素蛋白的放线菌菌株，从发酵培养温度，起始pH值，培养基碳源、氮源、金属离子等方面对该菌株进行发酵条件初步优化，通过测定发酵产酶酶活及丝素蛋白的降解率，来寻找最佳产酶条件，以期为利用酶法生产丝肽产品探寻一条有效新途径，为蚕丝资源再利用拓展开辟一条新渠道。 　　1 材料与方法 　　1.1 菌种 　　从来源于宁波某小区的土壤中分离筛选出可降解丝素蛋白的高阳链霉菌。 　　1.2 丝素的脱胶处理 　　选择干净的蚕茧，于烘箱放置10 min，称量，每10 g为一份。取1 L去离子水于烧杯中，加入5 g Na2CO3，加热至沸腾。待水温冷却至80 ℃，加入10 g烘干蚕茧（充分搅拌），于80 ℃水浴锅中脱胶30 min。30 min后取出，过滤，留脱胶丝。60 ℃蒸馏水清洗3遍，再常温蒸馏水清洗3遍，清洗好后拧干，将脱胶丝展开自然风干后，收集备用。 　　1.3 培养基 　　高氏一号培养基：淀粉20 g，NaCl 0.5 g，KNO3 1 g，K2HPO4 0.5 g，MgSO4?7H2O 0.5 g，FeSO4?7H2O 0.01 g，蒸馏水1 000 mL，琼脂20 g，pH值7.0。种子培养基：NaCl 0.5 g，K2HPO4 0.5 g，MgSO4?7H2O 0.5 g，FeSO4?7H2O 0.01 g，蒸馏水1 000 mL，pH值7.0。发酵培养基：NaCl 0