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西瓜种子细菌性果腐病消毒方法研究 　　摘要：研究了物理方法（干热处理）、化学药剂（甲醛、盐酸、过氧化氢、次氯酸钠）以及杀菌剂对西瓜（Citrullus lanatus）种子细菌性果腐病消毒效果的影响。结果表明，3%的HCl和5%的甲醛处理20 min及0.5%或1% ZC处理1 h，对西瓜种子细菌性果腐病防治效果良好，对西瓜种子发芽率及发芽势无显著影响，且对种子胚根生长具有明显的促进作用，建议在生产上推广使用。 　　关键词：西瓜（Citrullus lanatus）；细菌性果腐病；消毒方法 　　中图分类号：S436.5；S651 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）11-2808-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.11.024 　　瓜类细菌性果腐病（Bacterial Fruit Blotch，BFB）主要初侵染源为带菌种子，通过伤口、皮孔侵染，是典型的由种子带菌引起的侵染性病害[1]。病害一旦发生，幼苗大面积死亡，果实大面积腐烂，且扩展非常迅速，导致瓜类作物毁灭性的损失。 　　生产健康的种子，防止种子带菌和种子进行消毒是有效控制果腐病发生的主要措施[2]。目前种子消毒的方法主要有物理处理、化学药剂处理、发酵处理等。Lovic等[3]发现1% HCl处理15 min可降低种子发病率；赵秋菊等[4]发现先用5% HCl或5%双氧水或过氧乙酸40倍稀释液消毒1 h，再经71 ℃干热杀菌4 d可将西瓜病株率降低到1%以下；张国裕等[5]发现用0.5%漂白粉消毒5 min即可杀死种子表皮所携带的果腐病病菌，而干热处理对该病菌的杀菌效果不明显。前人关于西瓜种子果腐病消毒的研究已有报道，但存在标准不统一、研究结果不一致等问题。为此，试验结合前人的研究结果，对多种果腐病的消毒方法进行了研究，以期在同一标准下筛选出适合西瓜种子消毒的方法，为西瓜细菌性果腐病的防治提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　供试西瓜品种为早佳8424，由新疆农业科学院哈密瓜研究中心提供。细菌性果腐病病原菌（Acidovorax avenae subsp. citrulli）（以下简称Aac）由华中农业大学植物病理学研究室提供。 　　供试化学品：甲醛和过氧化氢均购自国药集团化学试剂有限公司，盐酸购自信阳市化学试剂厂，次氯酸钠购自天津市东丽新中村。杀菌剂：杀菌剂1号（ZC）购自中国农业科学院、杀菌剂2号（XJ）购自新疆农业科学院。 　　KBA培养基配方：蛋白胨20 g，硫酸镁1.5 g，磷酸氢二钾1.5 g，甘油10 g，琼脂粉13 g，去离子水定容至1 000 mL，pH 7.0～7.4。KB液体培养基配方：KBA配方中不加琼脂粉。 　　1.2 抗利福平Aac菌株的诱变 　　制备含0.05、0.1、0.5、1、2、5、10、20、30、50、75、100 μg/mL利福平（Rif）的KBA平板，从低浓度到高浓度逐次诱变抗100 μg/mL Rif的Rif-Aac菌株，在含100 μg/mL Rif的KBA平板上继代培养5代后保存备用。 　　1.3 Rif-Aac带菌西瓜种子的制备 　　将Rif-Aac菌株在KBA平板上划线培养48 h（28 ℃），挑取单菌落，接种于含100 μg/mL Rif的KB培养液中，30 ℃下200 r/min振荡培养24 h。将培养菌液在6 000 r/min下离心5 min，弃上清液后收集菌体，用0.1 mol/L的无菌PBS（pH 7.2）缓冲液重新悬浮，装入250 mL三角瓶中，调整菌悬液OD600 nm介于0.3～0.4（菌体浓度约108 CFU/mL）之间。将西瓜种子充分浸入菌悬液中，250 r/min振荡培养1 h，滤去菌液，自然风干后备用。 　　1.4 种子消毒方法 　　1.4.1 物理方法 干热处理在烘箱中进行。采用温度、时间双因素随机区组设计，温度设70、75、80 ℃ 3个水平，时间设24、48、72 h 3个水平，以接种过Aac的种子（CK1）和健康种子（CK2）为对照，共11个处理，每处理3次重复，每重复100粒种子。种子干热处理后浸种，采用平皿培养法将种子置入灭菌的滤纸上，加入无菌水保湿，置于30 ℃培养箱催芽，120 h后测定发芽率，统计发病种子数。从已催芽的种子中选取30粒播种于消毒基质中，进行穴盘育苗，观察并统计发病率。 　　1.4.2 化学方法 采用药剂浓度、处理时间双因素随机区组设计，分别配制1%、3%、5%的HCl和甲醛，1%、5%、10%的过氧化氢，1%、2.5%、5%的次氯酸钠；以上各药剂处理时间设10、20、30 min 3个水平。从各药剂消毒后的沙培苗中随机选取