实验十紫外分光光度法测定苯甲酸含量.docVIP

《仪器分析》课程授课教案　　　NO. 08(实验2) 第一章 紫外—可见分光光度 【实验课题】实验2 紫外分光光度法测定苯甲酸含量 【授课班级】 【实验时间】【实验地点】30＃203、204 【实验课时】4课时 【实验目的与要求】 1.掌握紫外分光光度法测定苯甲酸的原理; 2.了解紫外分光光度计的构造; 3.掌握紫外分光光度计的正确使用; 4.学会工作曲线的制作和样品的测定 【实验重点】分光光度计的正确使用、工作曲线的制作 【实验难点】工作曲线的制作 【实验方式与手段】项目教学 【实验用具】7504型紫外分光光度计 【实验过程】 ●讲授新课 0.实验原理 紫外-可见吸收光谱法进行定量分析的依据是朗伯-比尔定律，其数学表达式为： = bc 其中：A为吸光度；I0和I分别为入射光强度和透射光强度；为摩尔吸光系数，b为物质吸收层的厚度，c为物质的浓度。 根据朗伯-比尔定律，物质的浓度可通过测量吸光度的方法测定。光度分析时，分别将空白溶液和待测溶液装入厚度为b的两个吸收池中，让一束一定波长的平行光分别照射空白溶液和待测溶液，以通过空白溶液的透过光强为I0，通过待测溶液的透过光强为I，根据上式，又仪器直接给出吸光度。当吸收池及入射光的波长和强度一定时，吸光度正比于被测物的浓度，因此，可根据测得的吸光度值求出待测溶液的浓度。 紫外-可见吸收光谱法所使用的仪器成为分光光度计，它的主要组成部分有五个部分组成，即：光源，单色器，吸收池，检测器，信号显示器；可见光区采用钨灯光源，玻璃吸收池，单色器为光栅。 1.仪器????1.1紫外分光光度计(7504、751型)； 1.2石英比色皿(1cm)：2个； 1.3容量瓶(100mL)：7只 1.4吸量管(1mL、2mL、5mL、10mL)：各1只。 　 2.试剂 2.1苯甲酸标准溶液(1mg/mL)； 2.2未知液：浓度约为50～55ug/mL。 3.实验操作????3.1 吸收池配套性检查 石英吸收池在220nm装蒸馏水，以一个吸收池为参比，调节τ为100%，测定另一吸收池的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，记录第二比色皿的吸光度值作为校正值。 3.2 吸收曲线的绘制 准确吸取未知液5mL，于100mL容量瓶中配成浓度约为10ug/mL的待测溶液，以蒸馏水为参比，于波长200～300nm范围内测定吸光度，作吸收曲线，从曲线上查得最大吸收波长（227nm附近）。 吸收曲线参见图1。 3.3 标准曲线的绘制 准确吸取苯甲酸标准溶液若干体积，稀释成一系列不同浓度的标准溶液（0～16ug/mL），于最大吸收波长分别测出其吸光度。然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制出标准曲线。??? 3.4 样品测定 由步骤3.2的测量结果，从标准曲线查出样品的浓度。??? 4.结果计算 根据未知液的稀释倍数，可求出未知溶液的浓度。 5.报告单： 5.1吸收曲线：溶液的浓度范围：______； λ/nm A λ/nm A λ/nm A λ/nm A 5.2.未知试样的定量测量 5.2.1.标准曲线的绘制： 测量波长：__________；标准溶液原始浓度：_________。 溶液代号 吸取标液体积，mL ρ，ug/mL A 0 1 2 3 4 5 6 7 8 2.未知物含量的测定 平行测定次数 1 2 吸光度，A 查得的浓度，ug/mL 原始试液浓度，ug/mL 计算公式： 定量分析结果：未知物的浓度为__________________。 ●布置实验报告： 1、工作曲线用坐标纸画； 2、要把原始数据贴在实验报告中； 3、格式要完整