实验六--血细胞计数及血涂片制作概要.ppt

实验六 血细胞计数及血涂片制作 血细胞计数 1．熟悉并清洗计数板和盖玻片 2．稀释血液： 血样采集：兔耳缘静脉采血 血样抗凝：肝素钠抗凝 血样稀释：如下 实验操作 红细胞稀释液：生理盐水 白细胞稀释液：冰醋酸 (盐酸) 红细胞计数：0.9% NaCl 1.99mL + 0.01mL血，稀释200倍 白细胞计数：1% HCL 0.38mL + 0.02mL 血，稀释20倍 3．充池：（混匀，从中间取） 4．静置计数板 2min 5．计数 6．计数原则：数上不数下、数左不数右 7. 计算：红细胞数/L=N*50*106*200=N*1010 白细胞数/L=N/4*10*20*106=N*5*107 血细胞计数计数板 保证计数板和盖玻片清洁；以防影响计数结果的准确性 。 一次完成充池，如充池过少、过多、有气泡或出现任何碎片，应拭净计数板及盖玻片后重新操作。 充池后平放计数板，不能移动盖玻片。 计数板中细胞如果严重分布不均，应重新充池计数。 凡压线的细胞应按照数上不数下、数左不数右的原则，避免漏数或重复计数。 注意事项 血液涂片的制备 1、每份样本制作3张血涂片。要求所用玻片清洁、干燥、无尘，大小为25 mm×75mm，厚度为0.8～1.2mm。并有明确标记。如果样本中白细胞数量少时，需要制备更多血涂片（如6张）。 2、使用EDTA－K2抗凝血液样本时，应在采集后4小时内制备血涂片。在制片前，样本应充分混匀。注意，样本不能冷藏。 3、用楔形技术制备血涂片。在玻片近一端1/3处，加一滴（约0.05ml）充分混匀的血液，握住另一张较狭窄的、边缘光滑的推片，以30o～45o角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳地推动推片至玻片的另一端。 4、在1小时内，用染液染色；或在1小时内，用无水甲醇（含水量﹤3%）固定后染色。 推片技巧 推片倾斜45°±1，推成血膜长度25～35mm，宽度18～20mm，血膜四周留有空隙区，血膜终尾离玻片终端至少10mm，血膜均匀，薄如蝉翼，尾端形如弧状，迅速扇（摇）干，血膜具有头、体、尾不同厚薄区域。此外，涂片时，还要考虑患者的血液状态，如贫血程度、血液粘稠度、WBC或有核细胞多少等因素，调整推片技巧。 血膜至玻片边缘约5mm 血膜至玻片一端约为总长1/3 血涂片头部，涂片厚 血涂片体部的检查区域 血涂片尾部，涂片太薄 染色步骤 取新鲜血液涂片，晾干； 加刘A溶液（覆盖血涂片为宜），染色30s； 加刘B溶液于A液上（约为A的2倍），以洗耳球吹出微风，使液面产生涟漪，染色30s-1min； 水洗，干燥，镜检；