微生物实验指导概要.doc

《食品微生物》 实验指导 乌兰察布职业学院农学与马铃薯工程系 编写人：张建飞 2016年3月 《食品微生物学》实验指导 一、课程性质和任务 食品生物学实验是一门专业基础实验课。该课程的任务是教会学生利用光学显微镜观察各种微生物，学会常用培养基的制备、常用玻璃仪器的灭菌，学会分离培养微生物，学会鉴定微生物。 二、教学的目标及要求： 通过该课程的学习，要求学生达到如下目标： 1 学会普通光学显微镜的使用方法，特别是利用油镜观察细菌的方法。 2 学会微生物的制片染色技术。 3 学会微生物细胞的大小测定及数量测计技术。 4 学会培养基的制备、灭菌及微生物的分离纯化技术。 5 学会鉴定细菌的常规生理生化实验方法 为达到上述目标，要求学生一定要自己亲自动手独立实验，实事求是的完成每一次实验报告，并做好每次实验前的预习。 三、实验内容与学时分配 序号 项目名称 实验内容 学时 实验性质 主要耗材及仪器设备 1 实验一 显微镜的使用与细菌形态构造的观察 目的：介绍微生物实验的实验要求，重点掌握显微镜的使用，认识细菌的基本形态。 内容：（1）观察前的准备（2）低倍镜观察? （3）高倍镜观察? 2 基础必修 显微镜、香柏油、二甲苯、镜头纸、菌种 2 实验二 真菌制片及形态观察 目的：学习水浸制片法观察真菌的形态内容：1.观察几种代表真菌的无性孢子2.观察几种代表真菌的有性孢子 2 基础必修 载玻片、盖玻片、显微镜 3 实验三 细菌涂片制备、染色及观察 目的：进一步掌握正确规范使用显微镜的方法和技能。理解简单染色和革兰氏染色的原理。掌握革兰氏染色的方法与规范操作。巩固显微镜的使用方法和无菌操作技术。 内容：革兰氏染色 4 基础必修 结晶紫、碘液、95%乙醇、蕃红、载玻片、显微镜 4 实验四 玻璃仪器的包扎与灭菌实验 目的：(1) 了解微生物实验中玻璃器皿的洗涤重要性(2) 掌握玻璃器皿的洗涤的方法(3) 熟悉玻璃器皿灭菌原理及方法 内容：（1）玻璃器皿的洗涤(2)玻璃器皿的包扎(3)玻璃器皿灭菌 2 基础必修 试管、各种规格的玻璃吸管、培养皿（平皿）、三角瓶及烧杯、玻璃涂布棒等。 装培养皿的金属筒、干热灭菌箱等。 5 实验五培养基的制备 目的：学习培养基的配制及灭菌方法内容：1.配制牛肉膏琼脂培养基和马丁孟加拉红－链霉素培养基2.准备吸管、无菌水、平皿等无菌器材3.进行培养基和无菌器材的灭菌操作 4 基础必修 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、孟加拉红（四碘四氯荧光素）、链霉素、三角瓶、试管、1ml吸管、平皿、灭菌锅 6 实验六微生物显微直接计数法 目的：学习微生物的大小测定和显微计数法内容：1.测定Saccharomyces cerevisiae的细胞大小。2.用血球计数板测定每支斜面上S.cerevisiae的菌数 2 基础必修 载玻片、镜台测微尺、目镜测微尺、血球计数板、显微镜 7 实验七微生物细胞大小的测定 目的：观察并掌握菌种个体形态和菌落特征、学习测微技术，测量细菌的大小。 内容：酵母菌菌体大小的测定 、酵母菌数量的测定 2 镜台测微尺、显微镜、载玻片及盖玻片、接种针、0.1%美蓝液、孔雀绿染液、菌种。 8 实验八菌种的分离纯化 目的：学习微生物的稀释平板分离法及划线分离法内容：采样、样品稀释，制备培养基平板，平板画线法分离培养 2 基础必修 培养基、试管、培养皿、三角瓶、接种环、酒精灯、恒温恒湿培养箱。 9 实验九食品中菌落总数的测定 目的：掌握菌落计数的方法，掌握食品细菌菌落总数的测定报告方式。 内容：取样稀释培养菌落计数 4 基础必修 食品检样、牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、无菌生理盐水、无菌培养皿、无菌移液管、无菌不锈钢勺。 10 实验十食品中大肠菌群的测定 目的：学习食品中大肠菌群检测程序方法，掌握食品中大肠菌群检测结果的报告方式。 内容：初发酵试验、平板分离、 复发酵试验 6 选修提高 食品检样、乳糖蛋白胨发酵管、伊红美蓝琼脂平板、EC 肉汤、磷酸盐缓冲稀释液、蛋白胨稀释液、无菌生理盐水、革兰氏染色液、恒温箱、冰箱、恒温水浴、天平、显微镜、直径为90mm的平皿、试管、吸管、广口瓶或三角烧瓶、玻璃珠、载玻片、酒精灯、试管架。 合 计 30 四、教学方式及课程考核办法 所有实验在教学实验室里由教师指导完成。课程结束后分笔试和操作考试，操作考试采取一个教师对一个学生的方式进行。内容包括：①细菌的革兰氏染色；②微生物的显微计数；③微生物的划线分离；④微生物的稀释分离。四项考试内容由学生自己抽签选择其中一项在规定时间内完成，超过规定时间扣分。笔试成绩和操作成绩各占考试成绩的50％。 五、主要参考书：1、赵斌、何绍