无菌检查法2010概要.ppt

无菌检查法 无菌检查的定义 中国药典2010年版对无菌检查的定义是：无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。 由于无菌是一个相对的概念，因此，对无菌检查的结果应该有一个正确的认识－即产品通过无菌检查仅仅意味着在该检验条件下，供试品未发现有微生物污染，并不表示所有的产品都是无菌的。 反之，当供试品中检出微生物污染，则可以认为批产品的微生物污染风险相当高。 隔离系统 可以不必使用洁净室，在普通实验室内，放置隔离系统就可以进行无菌检查实验 隔离系统一般分为实验区域、传递区域等 隔离系统通常采用臭氧或气态过氧化氢等消毒剂进行空间消毒 隔离系统通常具有高效空气过滤器，使操作区域符合局部100的要求 隔离系统通常对外界呈正压 对隔离系统，验证的重点是消毒效果的持续保持能力 无菌检查的设备 用于无菌检查的主要仪器设备有：超净工作台、集菌仪、生物安全柜、高压蒸汽灭菌器、电热恒温干燥箱、隔水式恒温培养箱、生化培养箱、立式冷藏柜和生物显微镜等。 上述仪器设备中，温度设备应进行校准或验证，超净工作台和生物安全柜应进行性能确认。校准、验证和确认的频次通常为每年。 温度设备的校准：对培养箱、干热灭菌器等温度设备，应进行热分布和热均匀性等指标的检定；对湿热灭菌设备应检定安全阀、压力表等安全装置，同时应采用生物指示剂进行有效性确认。 超净工作台和生物安全柜的性能确认：应进行洁净度和微生物数的测定，生物安全柜还应该进行气流流型和压差测定。 无菌检查的人员 应由具备微生物学专业背景，并经过无菌操作培训的专业人员来从事无菌检查 从事无菌检查的专业人员除了应该具备专业技能外，还应该具有高度的责任心和严谨细致的工作作风 上岗培训应至少包括以下内容 无菌操作的基本技能 无菌操作环境的使用、维护、验证技能 仪器设备的使用和维护、验证技能 培养基的配制和质量控制技术 不同产品无菌检查的操作技能 无菌检查方法验证的技能 无菌检查结果判断的能力 无菌检查异常结果的分析处理能力 阳性对照菌种的使用和生物安全知识 无菌检查的具体步骤 实验准备 人流、物流程序 消毒剂配制 环境微生物的采集 检验方法的确认 检验过程 结果观察与判断 记录 实验准备 洁净室的启用 在检验开始前，应确保： a.洁净室净化空调系统持续运转不少于1小时，并能够持续工作； b.洁净室持续开启紫外光灯不少于半小时； c.洁净室中有压差要求的房间之间的压差达到规定，并能够持续保持。 d.洁净室的更衣室内有新鲜制备的用于消毒双手的消毒剂。 在确认以上状态要求得到满足的情况下，可以启用洁净室。 培养基的准备 无菌检查至少需要准备以下培养基：液体硫乙醇酸盐培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、营养肉汤培养基等。实验室应建立培养基配制的标准操作规程并按规程配制上述培养基。 液体硫乙醇酸盐培养基每瓶分装略大于200ml。 改良马丁培养基每瓶分装略大于100ml。 营养琼脂培养基应根据需要制备平板和斜面，主要用于环境微生物样本的分离鉴定。 营养肉汤培养基每支分装10ml，用于菌种鉴定。 以上培养基按验证合格的灭菌程序灭菌。灭菌程序一般可选择121℃20分钟。在灭菌时应在灭菌器的上中下三层中分别放置留点温度计，并粘贴灭菌指示条。 灭菌结束后，应立即将所有培养基从灭菌器内取出，室温放置，自然冷却。营养琼脂斜面应趁热放置，平板应在洁净室内浇注。 无菌检查用培养基冷却后，应观察氧化层的高度，符合要求的，可用于无菌检查。 培养基的适用性检查 无菌检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶），培养14天，应无菌生长。该检查可以与样品的检验同步进行，其结果作为样品检验结果判断的一个重要参照指标。 培养基灵敏度检查： 菌种：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌和黑曲霉 菌液制备：取上述菌种，分别制备浓菌液，稀释至100cfu以下，用于接种培养基。 接种：硫乙醇酸盐培养基每管12ml，分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌和生孢梭菌，每种菌各两管培养基，另取1管作为空白对照；改良马丁培养基每管9ml，分别接种白色念珠菌和黑曲霉，每种菌各两管培养基，另取1管作为空白对照。分别置规定温度培养5天，逐日观察结果。 频次：干粉培养基购入后，首次使用时，应进行灵敏度检查，以后当更换培养基批号、培养基配制方法和灭菌程序发生变化时需要重新做灵敏度检查。 实验器材、消耗品的准备 无菌检查至少需要使用以下器材和消耗品： a.无菌衣、平皿、消毒剂配制缸、脱脂棉花球、纯化水、剪刀、镊子、止血钳 b.一次性使用集菌过滤器、一次性注射器、手套、口罩、环境微生物采集器材 c.稀释剂、冲洗剂 d.消毒剂、灯用酒精 其中a项在使用前应经过灭菌处理。灭菌方法根据器材的特点选择，无菌衣和脱