人乳头瘤病毒荧光定量PCR法检测概要.ppt

人乳头瘤病毒(HPV) 人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)属于乳头多瘤空泡病毒科(papovaviridae)乳头瘤病毒属，是一种可以引起人类黏膜组织良性及恶性肿瘤的病毒。 人乳头瘤病毒直径为55nm，分子量为54000道尔顿，为对称型的20面体，是由DNA核心和蛋白衣壳组成的无包膜双链DNA病毒。由双链DNA （8000个bps）分子的病毒颗粒及包裹其外的衣壳蛋白组成。 庞大家族：目前有100+种型别HPV，大约 20 种型别与癌症相关，根据HPV致癌危险性大小不同，分为高危型和低危型 与宫颈癌相关的高危型HPV有: 16,18,31,33,35,39,45,51,52,(53),56,58,59,68 低危型别有: 6,11,(42,43,44) 人乳头瘤病毒与疾病 低危型HPV主要引起子宫颈良性乳头瘤样变、肛门皮肤和外生殖器疣类病变； 高危型HPV主要引起宫颈癌、外阴癌、肛门癌等恶性肿瘤 其中HPV16和HPV18是引起宫颈癌的最常见的两种亚型，HPV16与宫颈鳞癌关系最为密切，HPV18易导致宫颈腺癌 妇产科门诊（皮肤科、泌尿外科门诊） 人乳头瘤病毒的传播途径 HPV主要通过直接或间接接触污染物品或性接触传播。 1 性传播途径； 2 密切接触； 3 间接接触：通过接触感染者的衣物、生活用品、用具等； 4 医源性感染：医务人员在治疗护理时防护不好，造成自身感染或通过医务人员传给患者； 5 母婴传播：婴儿通过孕妇产道的密切接触 人乳头瘤病毒的感染特征 HPV感染多为短暂性的，约有80％的女性在其一生中的某个阶段曾经感染。 通常HPV在感染后的6-12个月内可自行消失，只有少部分为持续感染。 高危型HPV持续感染是激发宫颈上皮恶性转化的最重要危险因素，它能使宫颈癌的发生风险提高250倍，是宫颈癌及癌前病变发生发展的必要条件。 一般从HPV最初感染到癌前病变，最终演变为宫颈浸润癌至少需要10--15年。 “几乎所有宫颈癌患者的病理样本中均能找到HPV病毒，从而印证了HPV是宫颈癌的主要原因，也使宫颈癌成为目前人类所有癌症病变中唯一个病因明确的癌症。” Jan M. Walboomers教授 预防HPV感染就可以预防宫颈癌，没有HPV感染就可以不患宫颈癌。 中华医学会妇产科分会主任委员北京协和医院妇产科专家 郎景和教授 宫颈癌的症状 （1）阴道流血 早期多为接触性出血；中晚期为不规则阴道流血。年轻患者也可表现为经期延长、经量增多；老年患者常为绝经后不规则阴道流血。 （2）阴道排液 多数患者有阴道排液，液体为白色或血性，可稀薄如水样或米泔状，或有腥臭。晚期患者因癌组织坏死伴感染，可有大量米汤样或脓性恶臭白带。 （3）晚期症状 根据癌灶累及范围出现不同的继发性症状。如尿频、尿急、便秘、下肢肿痛等；癌肿压迫或累及输尿管时，可引起输尿管梗阻、肾盂积水及尿毒症；晚期可有贫血、恶病质等全身衰竭症状。 HPV感染后，70%的人1年内自行清除，90%的人2年内自行清除。未清除而持续感染者发展成为CIN2/3等癌前病变。癌前病变发展到宫颈癌需要8—10年的时间。早检测早发现HPV病毒感染，及时治疗，可阻断宫颈癌的发生。 ASC-US：无明确诊断意义的鳞状上皮细胞病变 ASC-H：高级别鳞状上皮内病变 （LSIL：低度鳞状上皮内病变.HSIL：高度鳞状上皮内病变.） CIN：宫颈鳞状上皮的癌前病变，分为CIN1，CIN2，CIN3级别 人乳头瘤病毒的实验室检测 目前宫颈癌筛查的方法多采用宫颈细胞学检查及HPV病毒检测。 薄层液基细胞学检测技术（Thin-Cytologic Test， TCT） 二代杂交捕获技术(HC2) 实时荧光定量PCR技术 阴道镜活检一组织病理学 通过采集阴道或宫颈分泌物，获得脱落细胞后浸入液基细胞处理试剂中进行处理，试剂中的裂解成分能对红细胞进行裂解，去除红细胞对检验结果造成的干扰；同时试剂中的固定成分能保存固定白细胞、脱落上皮细胞等有价值的细胞；并使包裹在黏液中的有效细胞充分分离出来，防止有价值细胞的丢失。将有效细胞制备成细胞悬液，最后通过过滤离心方法清除黏液对制片的干扰，制成脱落细胞薄片。可用HE染色、巴氏染色或其他免疫组织化学染色等方法使细胞着色，再通过人工观察分析来检查阴道或宫颈的细胞形态，诊断子宫颈癌及其癌的前期变化、人乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒感染。同时还能发现部分癌前病变，微生物感染如霉菌、滴虫、病毒、衣原体等。 薄层液基细胞学检测技术 (TCT) 5 计算机 判读 15 min后 2 DNA-RNA 杂交 60 min 3 抗体 捕获 60 min 4 化学发光检测 30 min 1 DNA 分解 45 min 原理