农药速测讲稿概要.ppt

农药残留速测技术 胡草 酶抑制法理论知识 此种方法主要是从家蝇或其他动物组织中提取乙酰胆碱酯酶，将乙酰胆碱酯酶与蔬菜样本提取液混合，以碘化乙酰硫代胆碱为底物，二硫双硝基苯甲（ DTNB）为显色剂，经一段时间后比色，根据吸光值，计算乙酰胆碱受抑制的程度。 酶抑制法 如果蔬菜的提取液中不含农药或残留量很低，酶的活性就不被抑制，试验中加入的基质就被水解，水解产物与加入的显色剂反应产生颜色或水解产物本身有颜色。 酶抑制法 如果蔬菜的提取液含有农药并残留量较高时，酶的活性被抑制，基质就不被水解，当加入显色剂时就不显色或颜色变化很小。在412nm测定吸光度的变化，计算出抑制率就可判断农药（有机磷和氨基甲酸酯类）的残留情况。（有机磷和氨基甲酸酯类农药占全球农药的57%以上） 。 酶抑制法 酶抑制法 影响速测结果准确度的问题：一是酶的质量，这是最主要的因素。虽然该技术在全国已使用了几年，普及面已很大，但由于对酶的质量没有统一的标准，对市场上流通的酶产品没有质量监管，所以检测结果也是五花八门。目前提高酶的质量主要是提高酶的灵敏度和稳定性。二是检测设备的质量。三是操作过程的规范性。 酶抑制法特点 由于现阶段蔬菜农药残留主要是有机磷和氨基甲酸酯类农药超标，而对人体造成危害的是农药残留总量，农药残毒速测方法正适应了以上两个特点，可以快速检测上述两类农药严重超标的蔬菜水果，防止食用引起急性中毒，同时还具有短时间内检测大量样本、检测成本低、对于检测人员技术水平要求低、易于在基层推广等特点，是现阶段我国控制高毒农药残留的一种有效方法。但是只定性不定量。对一些含辛辣物质的蔬菜如萝卜、韭菜等，以及茭白、蘑菇，此方法不适用。 快速检测技术和试剂 速测仪的种类 速测仪的种类按一次可测定的数量分可分为三类： ——八通道以下的，即一次最多可测定七个样品。大部分厂家的仪器都属于这一类； ——大于8通道小于80通道的，目前有12通道和36通道的； ——80通道以上，即一次可测定80个以上样品。 速测仪的种类 从仪器分光结构上可分为二类： ——分光装置使用滤光片； ——分光装置使用光电二极管。 建议使用分光装置使用滤光片的仪器。 试 剂 提取试剂： p H = 8 缓冲液,一包加500毫升蒸馏水. (先加少量水溶解后在稀释) 胆碱酯酶：乙酰胆碱酯酶或丁酰胆碱酯酶，加入缓冲液25毫升,4℃以下保存。 显色剂： 二硫代二硝基苯甲酸(DTNB),一瓶加磷酸缓冲液25毫升,4℃以下保存。 底物：碘化硫代乙酰胆碱(ATCI) 或碘化硫代丁酰胆碱(B TCI)一瓶加磷酸缓冲液12.5毫升， 4℃以下保存。 蔬菜农药残毒快速检测流程图 结果计算 抑制率（%）= 抑制率：酶被抑制的程度 △A c :对照组3min 后与3min 前吸光值之差; △A s :样本3min 后与3min 前吸光值之差 抑制率与农药的浓度呈正相关的。 检测结果判断标准 检测结果以抑制率（%）表示 抑制70% 合格； 抑制≥70% 至少两次以上重复检测 不合格 用GC进一步定性定量分析。 （NY/T448-2001） 检测结果判断标准 抑制率≥70 %时,至少两次以上重复检测，蔬菜中肯定存在有机磷或氨基甲酸酯类农药残留，样品为阳性，用其他方法确认。 农药残毒快速检测技术关键点 采样要求 样品制备 试剂的配制与保存 检测过程 解释检测结果的异常现象 采样要求 随机抽取摊位上各部位的蔬菜, 每种样本至少取0.5～1kg左右, 要求具有代表性。 抽检样本要详细记录。如蔬菜种类、抽检地点、时间、蔬菜来源、批发商等，保证可追溯性。 样品制备 选取包含大、中、小个体具有代表性的蔬菜，擦净表面泥土，用取样器取样或剪成1cm见方碎片，待用。 叶菜、普通油菜：用取样器从叶片部位取样，不少于8片叶子。称取2g测定 花椰菜和青花菜：取花球部分，切成小块，混合均匀。 大白菜、甘蓝、球生菜：选取3至5棵菜，用取样器从蔬菜对称位置从表面穿至1-1.5cm处取样，混合均匀。 样品制备 果菜（番茄、茄子、辣椒）和瓜类（黄瓜、西葫芦）菜：从果实对称部位取果皮，切成见方小块，称取4g测定 豆类菜（包括：菜豆、豇豆、荷兰豆等）：选取多根菜豆，从中截取一段，再切成小段，混匀，称取4g测定 试剂的配制与保存 酶的要求 底物与显色剂 酶的要求 选择对国内常用的有机磷和氨基甲酸酯类农药较敏感以及活性高的胆碱酯酶。 以3min后与3min 前空白吸光值的差值即△Ac在0.4～0.8之间为佳（国标为0.3以上）。 如果空白△Ac低线以下,可适当加大酶的加入量，或减少溶解酶的缓冲液。 粉状的酶