CHO细胞大规培养试题.doc

摘要 CHO细胞是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary，CHO)，1957年美国科罗拉多大学Dr. Theodore T. Puck从一成年雌性仓鼠卵巢分离获得，为上皮贴壁型细胞。微载体细胞培养开始于19世纪60年代末期，最早使用离子交换凝胶（DEAE-Sephadex A50）作为载体，轻微搅动即可悬浮在培养基中。由于这种微载体带有电荷，利于细胞贴附于载体上进行生长繁殖。载体处于悬浮状态时，这样既可大大增加细胞附着面积，又使细胞能与培养基充分接触，进而有利于细胞的生长，因此能达到大量培养细胞的目的。后来根据细胞附着生长的特点，对微载体进行改良，使其电荷或其介质更利于细胞附着和生长。培养液中大量的微载体为细胞提供了极大的附着表面，1 g 微载体其比表面积可达6000 cm2，从而可实现细胞的高密度培养。首先将CHO细胞在无血清培养基（SAF-CHO-G-004）中进行无血清驯化。其次将CHO细胞（成功用无血清驯化后的细胞）用0.25%胰酶消化制成细胞悬液后，沿导流管加入含明胶微载体和SAF-CHO-G-004细胞培养基的WhcltonBioster瓶罐中连续培养生成一定量的种子细胞。最后将种子细胞进行大规模培养。运用半连续式培养来操作：在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间，从中取出部分培养物，再用新的培养液补足到原有体积，使反应器内的总体积不变。最后在细胞培养过程中进行细胞常数的检查和培养基内污染物的检测一些抗凋亡策略来增加细胞培养的效率。 [关键字]CHO细胞;明胶微载体;无血清培养;半连续式培养 目录 摘要 1 关键字：CHO细胞 明胶微载体 无血清培养 半连续式培养 1 绪论 3 1.2CHO细胞培养的特性 3 2.2.1培养基的物理性质 5 2.2.2无血清培养 7 3.1.2蛋白质作基质的微载体 9 3.1.3微载体培养原理与操作 10 3.2.2微载体培养种子细胞 13 3.2.3微载体培养的细胞传代 13 3.3半连续式培养（semi-continuous culture） 操作 14 4.2细胞常数检查 16 4.3CHO细胞培养内污染物的检测 16 4.3.2真菌污染对细胞的影响及污染物的检测 17 4.3.3支原体污染对细胞影响及污染物的检测 17 5抗凋亡策略在细胞大规模培养中的应用 18 5.1 营养物质抗凋亡 18 5.2 基因抗凋亡 19 5.3 化学方法抗凋亡 19 参考文献： 20 绪论 1.1引言 CHO细胞是中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary，CHO)，1957年美国科罗拉多大学Dr. Theodore T. Puck从一成年雌性仓鼠卵巢分离获得，为上皮贴壁型细胞，是目前生物工程上广泛使用的细胞系。工业生产上应用较多的是CHO-K1细胞，为转化细胞系，细胞染色体分布频率是2n＝22，系亚二倍体细胞。ATCC保存CHO-K1细胞株，编号为CCL-61，被广泛地用于重组DNA蛋白的表达。由于该细胞存在遗传缺陷，无脯氨酸合成基因，不能将谷氨酸转变为谷氨酸-_-半醛，培养过程中需在培养基中添加L-脯氨酸才能生长。并且由于该细胞已经霍乱毒素适应，形态学有所改变。最初细胞为贴壁型细胞，经多次传代筛选后，也可悬浮生长。 1.2CHO细胞培养的特性 CHO细胞虽可像微生物细胞一样，在人工控制条件的生物反应器中进行大规模培养，但其细胞结构和培养特性与微生物细胞相比，有显著差别： 动物细胞比微生物细胞大得多，无细胞壁，机械强度低，对剪切力敏感，适应环境能力差；倍增时间长，生长缓慢，易受微生物污染，培养时须用抗生素；培养过程需氧量少(氧传质系数kLa 大于10 h-1即可满足每毫升107 个细胞的生长)；培养过程中细胞相互粘连以集群形式存在；原代培养细胞一般繁殖50 代即退化死亡；代谢产物具有生物活性，生产成.本高，但附加值也高。 2.1DMEM培养基的组成与制备 序号 化合物名称 含量 (mg/L) 序号 化合物名称 含 量 (mg/L) 1 无水氯化钙 200.00 17 L-丝氨酸 42.00 2 硝酸铁 .9H 2 O 0.10 18 L-苏氨酸 95.00 3 氯化钾 400.00 19 L-色氨酸 16.00 4 无水硫酸镁 97.67 20 L-酪氨酸钠盐 104.00 5 氯化钠 6400.00 21 L-缬氨酸 94.00 6 无水磷酸二氢钠 125.00 22 D-泛酸钙 4.00 7 L-盐酸精氨酸 84.00 23 氯化胆碱 4.00 8 L-盐酸胱氨酸 63.00 24 叶酸 4.00 9 L-谷氨酰胺 584.00 25 肌醇 7.20 10 甘氨酸 30.00