实验核医学第六章课件.pptVIP

第六章 放射性核素示踪技术 第一节 放射性核素示踪技术的原理及特点 一、基本原理 1.成为示踪剂的前提 ①与被示踪物的同一性：化学行为、生物学行为； ②与被示踪物的可区别性：易于检测，可定性、定量、定位。 2.原理：被研究物质经放射性核素标记后，其生物学性质一般不受影响，它在体内的吸收、分布及排泄可借助被标记物所发射的射线由辐射检测仪器定位、定性及定量测得，进而了解该物质在体内过程中的动态变化规律。 第二节 放射性核素稀释法 利用化学物质在稀释前后质量不改变的原理建立的微量物质定量分析方法。 直接稀释法、反稀释法 操作简便、灵敏度高 可在正常生理状况下进行 第三节 物质转化的示踪实验 目的：揭示机体内重要生命物质的前身物、中间物及产物的关系，以及完成某种转化的必要条件。 一、参入实验 1.原理：标记物质A，引入生物体系一定时间，分离物质B，测量B的放射性。 2.主要参数： ①参入百分率：产物总放射性占前身物的百分比。 ②相对比活度：产物比活度占前身物的百分比。 参入率：标记前身物转化为产物的速率（标记前身物的利用率）。影响因素较多。 第四节 物质吸收、分布及排泄的示踪研究 一、物质吸收的示踪研究 主要是了解物质的吸收率、吸收的化学形式、吸收机制及吸收的解剖部位等。 1.吸收率的示踪实验 ①观察未吸收的残留量 ②整体技术法测定吸收量 ③血浆中示踪物的含量测定 ④测定尿排出量 第五节 细胞动力学的示踪研究 研究生物体内各类细胞群体的新生、增殖、消亡过程的规律，包括细胞处于不同状态时的时间参数、细胞数量、分布位置、细胞迁移途径及更新过程等。 一、细胞周期 四个时相 G1期：DNA合成前期，大量RNA及蛋白质合成 S期： DNA合成期，DNA及组蛋白合成 G2期：DNA合成后期，DNA合成停止， mRNA、蛋白质合成 M期：有丝分裂期 G0期：静止期 * * 放射性核素示踪技术：是利用放射性核素及其标记物作为示踪剂来研究生物机体各种物质的吸收、分布、排泄、转移及转化规律的一门科学。 示踪剂：一般为体内原有物质，分布稳定、动态平衡。小剂量无标记－被内源性物质湮没，大剂量－破坏平衡，导致系统异常；若加一“标记”，以区分原有物质，在系统内引入少量，即可区分开。 二、放射性核素示踪技术的特点 1.灵敏度高：10-12～10-15mol，10-18mol 2.检测方便 3.合乎生理条件 4.能定位 注意事项： ①测量仪器的使用 ②安全防护措施 ③辐射效应的影响 ④分离步骤 三、示踪实验的基本类型 1.整体示踪实验：研究物质吸收、分布、转运及排泄过程。 2.离体示踪实验：特定物质的转化规律及某些精细结构的功能研究。 3.双（多）标记示踪实验：物质代谢过程中某分子内两部分的代谢规律，或同种分子在不同形态或不同物质的运动转化规律。 四、需注意的方法学问题 1.选择合适的示踪物 ①射线类型：整体－γ射线 离体或整体后取样－β、γ射线 ②半衰期：临床体内－短半衰期 体外－较长半衰期 研究生物体代谢及转化－长半衰期 适当考虑生物半衰期 ③放化纯度：一般95％ ④衰变产物毒性：核素本身及其产物对机体无害 ⑤比活度：一般应足够高 ⑥核素标记位置的选择：一般要定位，稳定，不脱落 2.合适的测定方法 根据射线类型而定。 实验核医学一般采用取标本离体测量－固体闪烁、液体闪烁、自显影、薄层扫描等。 3.示踪剂量的估算 不能用简单公式估算，因为： ①示踪剂进入体内的分布不均一性； ②在体内转化代谢速率的不一致； ③实验目的的不同，观察时间的差异。 一般用倒推法做估算，再通过预实验进一步调整。 4.示踪剂的引入途径 整体－静脉、腹腔、皮下、肌肉、口服、灌胃等。 离体－衡量法、脉冲法等 5.放射性样品的制备 准确观察示踪物在特定组织或细胞中的量及定位。 要求：①不能有非目标物质的放射性干扰； ②必须了解样品在处理过程中是否有损失。 6.数据采集 ①放射性含量 ②比活度 ③相对比活度 ④总放射性活度百分比 五、示踪实验中的同位素效应 同位素效应：物质转化时如分子中某一原子被它的同位素所取代，虽然反应性质不变，有时却会引起反应速率的改变。 一般选标记部位远离在体内发生化学键断裂的标记物。 会影响有关的生化反应，影响一些酶促反应的速率，进而影响物质的代谢过程。 1.初级同位素效应：直接涉及同位素所在键时发生的同位素效应