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第二章 培养基灭菌 一.灭菌的概念和必要性 灭菌:是指用物理或化学因子杀灭有生活 能力的细菌营养体和芽孢或孢子的方法。 消毒:消除病原微生物的措施。 在工业中一般都笼统地称为杀菌或灭菌。 工程上灭菌:是指使用物理或化学方法将培养基中的杂菌的细胞和孢子杀灭至不影响发酵为限。灭菌是为了保证进行纯培养(纯种)发酵。如有杂菌,可引起以下的后果:①生产菌和杂菌同时在培养基中生长,结果丧失了生产能力。②杂菌的生长速度有时比生产菌生长得快,结果使反应器中以杂菌为主。③杂菌会污染最终产品。④杂菌所产生的物质,使提取产物时发生困难。⑤杂菌降解所需要的产物。⑥发酵如污染了噬菌体,可使生产菌株发生溶菌现象。 1. 加热灭菌火焰灭菌、干热灭菌、湿热灭菌 2. 射线灭菌紫外线、阴极射线、X射线、γ射线 3. 化学药剂灭菌0.%~0.25%KMnO4溶液、0.5%~1%漂白粉溶液、75%酒精、0.25%新洁尔灭、10%甲醛溶液、苯酚溶液、来苏尔 工业上培养基灭菌使用的方法是湿热灭菌。 湿热灭菌简便、有效、经济。 三. 湿热灭菌的原理 湿热灭菌:就是直接用高温蒸汽灭菌。蒸汽在冷凝时释 放出大量潜能,蒸汽具有强大穿透力,蒸汽的湿热破坏 菌体蛋白质和核酸的化学键,使酶失活,微生物因代谢 障而死亡。 湿热灭菌的效果,取决与致死温度和致死时间。 致死温度:是杀灭微生物的极限温度。 致死时间:是在致死温度下或以上杀灭微生物所需时间。 热阻(对热抵抗力):微生物在某一特定条件(一定 的温度、加热方式)的死亡时间。 相对热阻:指在相同条件下两种微生物热阻的比值。 芽孢的热阻特别高的原因:①芽孢具有吡啶二羧酸,能增强对热抵抗力②芽孢厚而且结构致密,热不易透过③芽孢的游离水分少,蛋白质含水量较营养细胞蛋白质含水量低。 在实际生产中,由于不能完全了解杂菌的数量和类型,因此要以相对热阻大的芽孢作为灭菌的依据。 湿热灭菌分为分批灭菌和连续灭菌。 分批灭菌(实消):将培养基置于反应器中用 蒸汽加热,达到预定灭菌温度后维持一定时间, 再冷却到发酵温度,然后接种发酵,这叫分批 灭菌。 连续灭菌(连消):将培养基在罐外连续进行 加热、维持和冷却然后进入到反应器的杀菌方 法就是连续灭菌。 * * 主要内容 1. 灭菌的概念和必要性 2. 灭菌的方法 3. 湿热灭菌的原理 4. 培养基在工程上要解决的课题 5. 微生物的热死动力学 6. 影响培养基灭菌的因素 7. 分批灭菌设计 8. 连续灭菌设计 二. 灭菌的方法
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