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第四节 紫外-可见分光光度法应用 定性鉴别 纯度检查 定量测定 单组分定量 多组分定量 总结： 本次课介绍了紫外-可见分光光度法的应用，包括定性鉴别、纯度检查、含量测定；重点介绍含量测定的三种方法：吸光系数法、标准曲线法、对照品比较法。 重点掌握：含量测定的三种方法。 作业：掌握以上重点内容。 * 第一章紫外－可见分光光度法（3） 一、定性鉴别 有机分子的紫外吸收的波长和强度，主要取决于分子中的生色团和助色团及其共轭情况。 定性依据： 吸收光谱—形状、吸收峰数目、各吸收峰的波长位置、强度和相应的吸光系数值等。 方法：对比法—将试样的吸收光谱特征与标准化合物的吸收光谱特征进行对照比较，或利用文献所载的紫外-可见吸收图谱进行核对。 1、对比吸收光谱特征数据： λmax、ε或 E1cm1% 2、对比吸光度（或吸光系数）的比值： 不同吸收峰（或峰与谷）处测得吸光度的比值。 维生素B12（原料药）鉴别方法（ChP2005） 3、对比吸收光谱的一致性： 有标准品的情况下，配制相同浓度溶液，在相同条件下测定两溶液吸收光谱，是否一致；或与文献标准图谱比较一致性。 二、纯度检查 杂质检查 化合物在紫外-可见区没有吸收，而杂质有较强的吸收：乙醇或环己烷中含有少量杂质苯。 化合物有较强的吸收峰，而杂质在此波长处无吸收峰或吸收很弱，杂质的存在将使化合物的吸光系数值降低；杂质在此吸收峰处有比化合物更强的吸收，将使吸光系数值增大。 杂质→化合物的吸收光谱变形。 三、单组分的定量方法 吸光系数法、标准曲线法、对照品比较法 1.吸光系数法（绝对法） 原理：A=ECl，已知吸光系数时，根据测得的A直接求出被测物的浓度。 C=A/El 例：维生素B12水溶液在361nm处的E1cm1%值是207，1cm吸收池，测得A为0.414，溶液的浓度？ C=A/(El)=0.414/(207×1)=0.0200(g/100ml) = 0.2mg/ml 例：精密称取B12样品25.0mg，用水溶液配成100ml。精密吸取10.00ml，又置100ml容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中，于361nm（ E1cm1% 207 ）处测定吸光度为0.507，求B12的百分含量？ 2、校正曲线法 原理：A∝C，配制一系列已知浓度的标准溶液，在相同条件下测定其吸光度A值，以标准溶液浓度为横坐标，以A为纵坐标，绘制A-C曲线，可获得一条理论上通过原点的直线。在相同条件下测定试样溶液的A值，从曲线上查出试样的浓度。或作直线回归，得出直线方程，求出试样浓度。 优点：即使仪器单色光不纯也可得出试样准确浓度，也可消除因环境引起的仪器误差。 3、对照品比较法 原理：在相同条件下配制已知浓度的标准溶液和试样溶液，分别测定吸光度，依朗伯-比尔定律： As/Ax=Cs/Cx 例：精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀释至10.00mL；另配制对照液，精密称定对照品25.00mg，加水稀释至1000mL。在361nm处，用1cm吸收池，分别测定吸光度为0.508和0.518，求B12注射液注射液的浓度以及标示量的百分含量（该B12注射液的标示量为100μg/mL） *