遗传学设计实验——第三组1课件.ppt

实验背景 乳清蛋白 依据乳蛋白基因序列检测麋鹿与不同物种的亲缘关系 实验方法 依据乳蛋白基因序列检测麋鹿与不同物种的亲缘关系 引物序列来源 感谢梁前进老师一学期以来对我们的悉心指导！感谢同学们的支持与帮助。 我们的展示到此结束。 从遗传学探究 “四不像”到底与谁最像？ 课程名称：遗传学实验 专业：生物科学与生物技术 实验背景 麋鹿(Elaphurus davidianus )是我国特有的国家一级保护动物, 典型的湿地物种。 被国际自然保护联盟( IUCN )红皮书列为野外灭绝物种。 关于麋鹿 麋鹿出现于更新世前期。由于人类的猎捕和环境变迁, 麋鹿于1900年在我国本土灭绝。20世纪80年代中期, 我国启动了麋鹿重引进项目, 从此麋鹿重新踏上了中国的故土。麋鹿的身世、命运极具传奇色彩, 经历了种群繁盛、衰落、远渡重洋、寄居海外、本土灭绝、重归故里的演变, 其曲折的命运引起了国内外学者的极大关注, 为其种族健康繁衍和保护事业开展了大量的研究工作。 角似鹿非鹿 脸似马非马 尾似驴非驴 蹄似牛非牛 乳清蛋白（lactalbumin;lactoalbumin）是一种存在于几乎所有哺乳动物乳汁中的蛋白质，由123个氨基酸残基组成，其氨基酸序列和立体结构均与溶菌酶同源。含有α-乳清蛋白、β-乳球蛋白、β-酪蛋白和κ--酪蛋白四种，不同种类动物的四种蛋白含量以及序列都不相同，因此可以进行鉴别。 α-lactalbumin β-lactalglobulin β-casein κ-casein 实验设计 SDS电泳方法检测乳清蛋白 血清淀粉酶同工酶分析 依据乳蛋白基因序列检测麋鹿与不同物种的亲缘关系 SDS电泳检测乳清蛋白 SDS- PAGE 电泳是蛋白质分析中最常用的方法,也是乳清蛋白研究中应用最广泛的方法。该方法虽然不能有效分离乳清蛋白中的免疫球蛋白，但是α- 乳白蛋白和β- 乳球蛋白能很好的分离开, 因此可用于对α- 乳白蛋白和β- 乳球蛋白定性定量研究。 SDS- PAGE 的定量研究中多采用光度扫描或凝胶成像系统进行, 对仪器设备要求较高, 而本实验采用的定量方法更为简易, 只要用普通的扫描仪和Bandscan软件就可以进行, 而且结果良好。 SDS电泳检测乳清蛋白 实验用品： Sartorious 电子分析天平 AR1530 电子精密天平 DYCZ- 24D 双垂直电泳槽 DYY- 6C 型电泳仪 Canonscan3000 扫描仪 控温消煮炉KXL- 1010 真空干燥箱DZF- 6020 实验材料：β- 乳球蛋白标准品、α- 乳白蛋白标准品 低分子量标准蛋白质 实验样品：麋鹿、鹿、马、牛、驴五种动物的母乳 SDS电泳检测乳清蛋白 电泳所用试剂: 30%丙烯酰胺(Acr)、10%SDS(十二烷基磺酸钠)、1.5mol/L Tris- HCl 缓冲液, pH8.8、0.5mol/L Tris - HCl 缓冲液, pH6.8、10%过硫酸铵、TEMED (四甲基乙二胺)、样品缓冲液为去离子水4.0mL, 0.5 mol/L Tris- HCl, pH6.8 缓冲液1.0 mL, 甘油0.8 mL, 10%SDS(w/v)1.6 mL, 巯基乙醇0.4 mL, 0.1%(w/v)溴酚蓝0.2 mL、浓缩电极缓冲液为15 g Tris, 72g 甘氨酸, 5 g SDS, 用水溶解至1000 mL, 染色液为0.1%的考马斯亮蓝R250, 40%的乙醇, 10%的冰醋酸、脱色液为10%的乙醇, 10%的冰醋酸。 SDS电泳检测乳清蛋白 结果预测 血清淀粉酶同工酶分析 血清淀粉酶( Serum amylase, AM Y) 是一种称为A-淀粉酶( A-1, 4 葡聚糖水解酶) 的内淀粉酶( Endoamylase) 。Ashton最早对猪和牛的AMY 同工酶进行了研究, 并发现存在多种同工酶酶谱而表现出多态。以后的大部分研究都集中在牛、猪和绵羊等家。有关鹿AM Y 同工酶的研究甚少, 仅见?à? ?à3等对偶蹄目动物AMY 同工酶比较研究中描述过马鹿AMY 同工酶酶谱及其多态性, 迄今尚无有关鹿属动物AMY 同工酶方面的比较研究报告。 血清淀粉酶同工酶分析 实验材料：稀碘液 加钙离子( 0. 02mo l/ L 氯化 钙) 和不加钙离子的两种pH5. 0 的醋酸-醋酸钠缓冲液 实验样品：麋鹿、鹿、马