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免疫胶体金技术及其在禽病诊断上的应用 报告人：杨京京 指导老师：徐春厚 主要内容 1.胶体金技术的研究历史 2.免疫胶体金技术的基本原理 3. 免疫胶体金的制备 4.免疫胶体金标记技术 5.免疫胶体金技术在禽病诊断中的应用 6.免疫胶体金技术应用的评价 7.免疫胶体金技术的前景展望 1.胶体金技术的研究历史 1857年法拉第用还原法从氯金酸水溶液中制备胶体金； 1971年Faulk等将胶体金引入免疫化学； Leuvcring于1980年最早报道了用胶体金检测人绒毛膜促性腺激素（hCG）的凝集试验； 1985年起有商品试剂盒供应 。 2.免疫胶体金技术的基本原理 胶体金是由氯金酸(HAuCl)水溶液在还原剂作用下，聚合成特定大小的金颗粒，颗粒之间因静电作用形成一种稳定的胶体状态，也称金溶胶。利用胶体金在碱性环境中带负电荷的性质，与蛋白质分子的正电荷基团因静电吸引而形成牢固的结合，这种结合对所标记蛋白质的生物活性无明显影响。除蛋白质分子外，胶体金颗粒还可以与其他多种生物大分子物质(如毒素、抗生素、激素、核酸、多肽缀合物等)结合。 3. 胶体金的制备 常用的制备方法有白磷还原法、抗坏血酸还原法、柠檬酸三钠还原法、鞣酸一柠檬酸三钠还原法、乙醇超声波还原法和硼氢化钠还原法。其中最常用的制备方法为柠檬酸三钠还原法，将0.01％的氯金酸溶液加热至沸腾，快速搅拌的同时迅速加入1％的柠檬酸三钠水溶液，继续加热，溶液颜色由浅黄色逐渐变为浅蓝色、蓝色、蓝紫色、紫红色，最后变为澄清透明的红色。此法制备程序简单，胶体金的颗粒形状、大小较均一。 4. 免疫胶体金标记技术 4.1 蛋白质的预处理 蛋白质溶液应绝对澄清无细小微粒，否则应先用微孔滤膜或超速离心除去。 （盐类成分能影响金溶胶对蛋白质的吸附，并可使溶胶聚沉，故致敏前应先用低离子强度的水透析。） 4.2 选择最适蛋白质用量 待标记的蛋白质储存液作系列稀释后，分别取0.1ml(含蛋白质5-40ug)加到l ml胶体金溶液中，另设一管不加蛋白质的对照，5min后加入0.1 ml 10％NaCl溶液，混匀后静置2 h，不稳定的金溶胶将发生聚沉，能使胶体金稳定的最适蛋白质量再加10％即为最佳标记蛋白质量。 4.3 标记 在接近并略为高于蛋白质等电点的条件下标记，蛋白质分子在金颗粒表面的吸附量最大。按照上页条件作胶体金标记。 5.免疫胶体金技术在禽病诊断中的应用 伴随着病原检测技术的进步，免疫胶体金技术以其快速，简便，可单份检测，灵敏度高，特异性强，稳定性好，检测标本种类多等优点开始被逐渐应用于禽病的病原诊断。 相关文献 王长美等用免疫胶体金试验诊断一发病率高、死亡快、疑似禽I型副粘病毒感染的鹅病例，证明该鹅群患禽I型副粘病毒病，实现了对禽1型副粘病毒病的快速鉴别诊断； 郝桂兰等利用免疫胶体金试验，采取病死鸽棉拭子样品30min内即完成对一发病鸽群的快速鉴别诊断 ； 王爱华等选择15nm的胶体金颗粒作为标记物，制备了鸡减蛋综合征病毒(EDsv)胶体金试纸条； 程安春等应用银加强胶体金探针检测提纯的鸡减蛋综合征病毒(EDSV)抗原的最低检出量为0.11719ug／mL 。 王泽霖等采用胶体金标记纯化的羊抗鼠IgG，建立了一种对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)进行检测的银加强金标免疫技术 。 6. 免疫胶体金技术应用的评价 6.1 免疫胶体金技术的优点 不同环境下的稳定性好、易保存、运输，在室温下可长期保存，不需冷藏; 操作简便、易于肉眼观察结果，不需经过特殊复杂培训; 操作者安全，对环境无污染; 操作快速、短时间获得检测结果，一般10-15分钟即可得出结论，便于大批量筛查; 取量少，检测成本均较低，无需特殊仪器; 适用范围广泛，检测标本种类多，可用于查血、尿液或粪便，因而适合各种检查; 特异性较强、结果有可重复性。 7.免疫胶体金技术的缺点 产品质量相差大，不宜质控，不能确保质量 ; 存在后带现象，标本需稀释测试。只能定性、不能定量、该方法只作为初筛诊断试剂，用于疾病诊断的辅助检查。 8.免疫胶体金技术的前景展望 该技术在动物医学研究虽然起步较晚，但可喜的是已经有诊断试剂面市，随着该技术的不断研究和发展，必将为兽医临床诊断试剂研究提供更加快速简便、商品化自动化的新途径。该法被认为是微生物和传染病及寄生虫病诊断技术标准化最有前途的新技术之一，并且可以进一步研发定量或半定量检测试纸条以及通用检测试纸条，以促进我国畜牧兽医事业的健康快速和持续发展。 报告完毕，谢谢大家！ *免疫学实验技术课程论文 ?2000 Prentice Hall * * *