核酸适配体在生化分离及检测领域的应用解读.ppt

2、 核酸适体的筛选技术被称为“配体指数富集系统进化”（SELEX)，它是以组合化学技术、PCR技术以及基因克隆测序技术等为基础的整合技术。 南昌大学信息工程学院 Information School of Nanchang University 南昌大学信息工程学院 Information school of nanchang university @骑着炮弹进城作品 核酸适配体在生化分离及检测 领域的应用 目 录 核酸适配体的简介 核酸适配体在生化分离中的应用 核酸适配体在检测中的应用 展望 一、简介 一）基本概念 1、核酸适体(Aptamer) 是经体外筛选技术( SELEX) 筛选出的能特异结合蛋白质或其它小分子物质的寡聚核苷酸片段，对可结合的配体有严格的识别能力和高度的亲和力。 二）核酸适配体的特点 （1）适配体的分子结构：其是一种短链DNA或RNA序列 （2）适配体与靶物质的结合基础：核酸分子形成的特定三 维结构 （3）适配体对靶分子有特异性和亲和力 （4）适配体有易修饰性和稳定性 三）核酸适配体的筛选过程 筛选方法的选择 寡核苷酸文库的建立 循环筛选 测序及特异性修饰 SELEX筛选的基本过程： 二、核酸适配体在生化分离中的应用 核酸适配体结合了抗体亲和技术及分子印迹技术 两者的优点，不仅选择性专一而且具有性质稳 定、易合成、易标记、分子量较小、目标分子广泛 等优势，因此其在生化分离领域显示出广阔的应用 前景。 应用实例： 基于核酸适配体的微流体装置温控分离AMP 设备基础： 样品与适配体间有特异亲和性 适配体构象受温度调控 基于适体的微流体萃取的原理 AMP的分子构型 AMP适配体的化学构型 微流体装置SPE的示意图 实验装置 实验结果表明：当温度达到32.5℃时解析率已达到93%，并且升温解析并不影响核酸适配体的循环使用。 局限性： 当待分离的靶目标是蛋白质时，复合物的解离就比较困难。因为适配体对蛋白质的结合能力，比小分子大约强三个数量级，解离常数在纳摩尔范围内，有的甚至在皮摩尔范围内。这时复合物的解离就需要借助较高的温度、高浓度的盐水、较高或较低的pH值等激烈的条件，但在这样的条件下蛋白质的活性会降低甚至会发生变性。 核酸适配体能够特异性地识别靶目标，这一性质使得适配体在检测领域大有用武之地。 二、核酸适配体在检测中的应用 目前核酸适配体已被应用在各类传感器中。比 如电化学传感器、光学传感器以及声学传感器。其中针对核酸适配体在电化学传感器中的应用研究最多。 目前核酸适配 体 已 被 应 用 在 了 很 多 种 检 测 手 段 中。比 如色谱、毛细管电泳和生物传感器等。其中关于核酸适配体在亲和色谱和传感器中应用的报道最为广泛。 四、展望 1.有关适配体在生化分离领域中应用的研究还比较少，其中怎样高效、温和地实现适配体、蛋白质复合物的解离是推动该方向发展的关键。 2.尽管近年来适配体在传感器方向的研究取得了瞩目的成果，但在实际应用中，还需进一步优化传感器的性能，并且多数研究只是针对于一种目标物的检测，针对于多种分析物的同时检测是未来适配体传感器发展的一大挑战。 谢谢！ 适配体为短链核苷酸片段，易被生物体内的核酸酶降解，对于短链RNA结构的适配体尤其如此 根据研究目的和靶标特点确定适配体应具有的特性以此设计具体的SELEX筛选方法; :依据选择的筛选方法建立具有合适长度和足够容量的寡核苷酸组合文库以固态化或游离态的靶标为基础,通过多次循环筛选获得适配体 铬金电阻加热器