2-2动物细胞培养和核移植.ppt

2.2 动物细胞工程 一、动物细胞培养 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 动物细胞生长特性： 细胞贴壁 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、 易于贴附。 细胞的接触抑制 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 传代培养 (subculture) 接触抑制(contact inhibition) 探究 探究 探究 探究 三、动物细胞融合 四、单克隆抗体 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞 （细胞膜具有一定的流动性） 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 灭活的病毒 物理（离心、振荡、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后 诱导细胞融合 去除细胞壁后 诱导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 单: 单个细胞 克隆: 无性繁殖 抗体: 化学性质单一、特异性强 * 离体植物器官、组织或细胞 愈伤组织 胚状体 植物体 脱（去）分化 再分化 （芽、根） 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养 使用的培养基： 固体 有机物（蔗糖） 植物激素 植物体细胞杂交 植物细胞A 植物细胞B 去细胞壁 原生质体融合 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 植物组织培养 植物细胞融合 1、植物体细胞杂交的结果是产生了？ 2、这个过程中涉及的原理是？ 杂种植株 细胞膜的流动性 、 植物细胞的全能性 多莉 克隆猴 动物细胞工程 常用的技术手段 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体 胚胎移植 核移植 1、概念： 放入二氧化碳培养箱中培养 动物细胞培养过程示意图 关键词: 接触抑制 细胞贴壁 原代培养 传代培养 2、过程 幼龄动物 取动物器官 和组织 剪碎组织 胰蛋白酶处理 细胞培养 单个细胞 原代培养(primary culture) 动物组织消化后的初次培养。 贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这样的培养过程称为传代培养。 细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 Normal cell Cancer cell 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 （单个细胞） 胰蛋白酶 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 （分解弹性纤维） 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 遗传物质未改变 遗传物质改变 接触抑制 剪碎 多数组织细胞固定在表面生长和分裂。 　　细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。 3.动物细胞培养的条件: 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量 元素、维生素、血清、血浆等。合成培养基） 3、温度和pH (36.5+0.5度, PH=7.2-7.4) 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 获得细胞或细胞分泌蛋白 细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体 培养结果 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖、动物血清 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 4、植物组织培养和动物细胞培养的比较 思考： 1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养基有何独特之处？ 2、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？需要脱分化吗？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 不需要。采用定向诱导动物的干细胞。 5、动物细胞培养技术的应用 （1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等