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第三章 临床细菌学检验 本章内容 第一节 标本的采集和处理原则 第二节 细菌的形态学检查 第三节 细菌的分离培养和鉴定 第四节 细菌的非培养检测方法 第一节 标本的采集与处理 一、标本采集的一般原则 1．早期采集 2．无菌采集 3．根据目的菌的特性用不同的方法采集 4．采集适量标本 5．安全采集 二、标本的处理 1. 对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检 2. 其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室 3. 若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存 4. 一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h 5. 标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出 6. 烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须按规定包装，由专人运送 7. 厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，可直接用抽取标本的注射器运送 细菌感染的检验程序 第二节 细菌的形态学检查 1.镜检可以了解有无细菌及大致的菌量 2.通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊断和治疗疾病有一定的参考意义 3.根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的初步识别和分类，用于细菌鉴定 细菌的形态学检查法 一、不染色标本 1.细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况 2.常用的方法有压滴法和悬滴法 有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显 的方向性位移 无动力：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无 位置的改变 3.有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作出初步鉴定 如疑似霍乱患者，镜下观察到来回穿梭似流星状运动的细菌，制动试验阳性，可初步推断为“疑似O1群霍乱弧菌”。 二、染色标本 （一）常用染料 1．碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等 2．酸性染料：有伊红、刚果红等 3．复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）等；荧光染料有荧光标记的抗体 （二）常用的染色方法 革兰染色（gram stain） 方法： 1、结晶紫初染 1 min 2、卢戈氏碘液媒染 1 min 3、95％酒精脱色 30sec～1 min 4、稀释石炭酸复红复染 1 min 原理： G+等电点低，带正电荷的碱性燃料作色牢固 G+细胞壁肽聚糖层多，G-细胞壁脂质含量高 G+含有多量核糖核酸镁盐与结晶紫、碘结合成大分子复合物 意义： 鉴定细菌 与致病性有关 参考选择抗菌药物 用途：一般细菌学检查或鉴定 （二）常用的染色方法 抗酸染色（acid-fast stain） 方法： 1、石炭酸复红初染加热3~5min，水洗 2、3% ~ 5%盐酸酒精脱色30s，水洗 3、碱性美蓝复染30s，水洗。 原理：分枝杆菌属的细菌，胞壁脂质多，其中的分枝菌酸与石炭酸复红结合成牢固的复合物，能抵抗脱色 意义：可将细菌分为两大类： 　 　 -抗酸性细菌 　 　 　 -非抗酸性细菌 用途：分枝杆菌属的直接检查与鉴定 （二）常用的染色方法 荧光染色 （1）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。 （2）主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。 鞭毛染色：可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数量，在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。 异染颗粒染色：用于白喉棒状杆菌的鉴定。 （二）常用的染色方法 第三节 细菌的分离培养和鉴定 接种培养基 细菌的分离培养和鉴定 一、培养基的种类和选择 培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择 二、分离及培养 细菌的接种、细菌培养方法 三、细菌的鉴定----生化反应和其他方法 碳水化合物的代谢试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验 一、培养基的种类和选择 培养基（culture medium） 是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。 (一)培养基的组成成分 1．营养物质 蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、 无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子 2．凝固物质 琼脂、明胶、卵白 3．抑制剂和指示剂 胆盐、蔷薇酸等，酚红、中性红、溴甲酚紫等 （二）培养基种类 1．基础培养基（based medium） 2．营养培养基（nutrient