9核酸性质.ppt

* 一、酸水解（了解） 主要水解糖苷键，且嘌呤糖苷键更易。 DNA pH1.6；37℃ －－－－－－→ 无嘌呤酸＋嘌呤 核酸 98～100%甲酸 175 ℃ ；2h 戊糖＋磷酸＋嘌呤＋嘧啶 第一节 核酸的表征 二、碱水解（了解） DNA 1mol碱；100℃ －－－－－－→ 片段 RNA 0.3～1mol碱 37 ℃ ；18h 2′或3′-核苷酸 （难以水解） 因为磷酸先与2′位羟基成环，然后再开环生成2′或3′-核苷酸。 DNA无2′位羟基，故较RNA耐碱。 三、酶水解（掌握） 水解磷酸二酯键 据有无专一性 磷酸二酯酶 核酸酶 底物为DNA和RNA 底物为DNA或RNA 据作用方式 内切酶 外切酶 限制性内切酶 据断裂酯键位置 3′-磷酸酯键 5′-磷酸酯键 据二级结构：双链酶、单链酶 据外切方向：3′→5 ′酶、5 ′→3 ′酶 核酸酶H：水解DNARNA杂合分子中的RNA 举例 无专一性，外切 P－RN－P－RN－P－RN－P－RN－P－RN－P－RN－P ↑ 牛脾磷酸二酯酶 （SPDase） 得3′-核苷酸 ↑ 蛇毒磷酸二酯酶 （VPDase） 得5′-核苷酸 但有3-磷酸时，不 有专一性，内切 ···P－RPy－P－ ··· RPu－P－···－RG－P－ ·········RA－P－··· ↑ 牛胰RNA酶 （RNaseⅠ） ↑ RNA酶U （RNaseU） ↑ RNA酶T1 （RNaseT1） ↑ RNA酶T2 （RNaseT2） 无专一，内切 牛胰DNA酶（DnaseⅠ） 切3′-磷酸酯键 单链 －－－→ P-约4核苷酸-OH 双链 －－－→ P-约4核苷酸-OH HO-约4核苷酸-P 牛脾DNA酶（DNase Ⅱ ） 切5 ′ -磷酸酯键 同上，约6个核苷酸 专一，内切 限制性内切酶 双链，切3 ′ ，选4～6个核苷酸序列 ······123456······ ······123456······ → ······1234 ······1234 ＋ 56······ 56······ ······123456······ ······123456······ → ······ ······123456 ＋ 123456······ ······ 齐头末端 粘性末端 碱基显碱性 pK在9以上 磷酸显酸性 pK1在1以下，pK2在6左右 核苷酸、核酸为两性化合物 由于磷酸的酸性大于碱基的碱性，核苷酸pI较小， 在3以下 由于核酸中绝大部分磷酸只剩余一个可解离基团 （ pK2 ），核酸的pI较大，在7左右 四、核酸的酸碱性质（了解） 核酸的碱基具有共扼双键，因而有紫外吸收性质，吸收峰在260nm（蛋白质的紫外吸收峰在280nm）。 用此性质可测定核酸，称紫外分光光度法 测定时，或者作标准曲线；或者用下列经验数据： A值为1相当于：双链DNA 50μg/mL RNA/单链DNA 40μg/mL 寡核苷酸 20μg/mL 用此性质可鉴定DNA/RNA的纯度 纯DNA A260/A280 应大于1.8 纯RNA A260/A280 = 2.0 A 260 280 λ 五、核酸的紫外吸收（熟悉） 核酸的光吸收值比各核苷酸光吸收值的和少30~40%，当核酸变性或降解时光吸收值显著增加（增色效应），但核酸复性后，光吸收值又回复到原有水平（减色效应）。 核苷酸总吸光度 天然DNA 变性DNA 用增色效应和减色效应可测定核酸变性或复性的程度 第二节 核酸的变性和复性 一、核酸的变性（重点） 变性的概念、因素、本质等同蛋白质变性 DNA变性是个突变过程，类似结晶的熔解。将紫外吸收的增加量达到最大增量一半时的温度称熔解温度(melting temperature, Tm)。 Tm Tm 由热引起的变性称为热变性。热变性一半时的温度称为溶解温度/熔点/解链温度/Tm