布病的实验室诊断概要.ppt

离开微生物实验室前，脱掉工作服后，应进行手的清洗。离开生物安全2级和3级实验室时，脱防护服后再次用肥皂及流水冲洗手。 消毒可使用0.3～0.5%碘伏消毒液或快速手消毒剂，如新洁尔灭醇、75%医用酒精或60%的异丙醇等3—5ml擦于手指、手掌、手背，揉搓1～3分钟。 良好的内务行为 谢谢大家! * * * * * * 中国分离株的基因型分布 省份 主ST型 菌株数 主ST型菌数 主ST型比例 内蒙古 8 72 26 36.1% 四川 8 11 6 54.5% 新疆 8 11 5 45.5% 宁夏 8 10 6 60.0% 广西 21 7 2 28.6% 河南 8 7 3 42.9% 山东 8 7 5 71.4% 辽宁 32 5 2 40.0% 青海 8 5 4 80.0% 上海 8 5 2 40.0% 安徽 4 0.0% 甘肃 29 4 2 50.0% 广东 8 4 2 50.0% 吉林 8 4 3 75.0% 布鲁氏菌血清学检测 常用方法有： 虎红平板凝集试验 试管凝集试验（莱特试验） 半胱氨酸试管凝集试验 抗人球蛋白试验 Amsterdam, The Netherlands www.kit.nl 虎红平板试验 Rose-Bengal Plate Agglutination Test 检测特征（流行率低） 灵敏度 92.9 （急性病例） 特异性94.3% （无暴露史） 特异性91.7% （重复暴露） 特异性76.9 （既往布病患者） Ruis-Meza et al Clin Microbiol Infect. 2005;11(3):221-5 不同来源（品牌）和批次的抗原质量差异很大 难以解读（弱阳性） 由于暴露和非特异性反应，在疾病流行地区的表现不良 需要确定取舍值 结论 诊断功效在很大程度上取决于制剂来源和疾病流行程度，需要确定取舍值 虎红平板凝集试验 它是一种半定量的凝集反应试验。所用抗原是用虎红(四氯四碘荧光素)色素染成的一种酸性抗原，具有克服非特异性反应，对检查小分子抗体IgG较为敏感的特点。 虎红平板凝集试验(RBPT)方法:在清洁的玻片上加0.03ml的受检血清，然后再加入上述标化抗原悬液0.03ml，使充分混匀，在4分钟内观察结果，以出现可见的凝集反应为阳性。 虎红玻片凝集试验（RBT） 筛查试验: 简便、实用、快速、经济，适用于基层单位检验 全血玻片凝集反应 在一张清洁的破片上加1滴赫德逊氏反应抗原，然后在抗原上加1滴受检血液或关节腔内积液，可用加样器吸头使其混匀，在酒精灯上稍微加热，促进反应，在8分钟内观察结果，凡在此时间内出现凝集者为阳性。也可以加入0.08-0.01ml不同的血液量，再加入1滴抗原，粗测血标本效价。 玻片凝集的评价 虎红平板凝集试验和全血玻片凝集试验为初筛、定性凝集试验或半定性凝集试验，优点是较试管凝集试验操作更简便，检测迅速，尤其是虎红平板凝集试验是在酸化抗原基础上制备的带有色素的抗原制剂，经大量的研究资料证明，本法与常规血清学试验有较高的符合率，是人畜布氏菌防治工作中，广泛采用的一种筛选试验方法。 但此两种平板试验，尤其是全血玻片凝集试验，可能出现非特异性凝集反应，在单以平板凝集反应诊断布氏菌病时，应考虑到此点，以免误诊。对阳性和疑似标本必须进行SAT确证，才能作为实验结果。 RBT 注意事项 抗原质量 被检血样 反应板 结果观察和判定 记录 报告 诊断价值与意义 与其它实验的关系 试管凝集(莱特试验) 原理 在已知的特异性抗原—布氏菌抗原的悬液中加入未知的被检患者血清，若患者血清中含有布氏菌抗体，抗原与抗体发生肉眼可见的凝集反应。 可作为布氏菌病早期诊断方法，病人常于发烧的第1天起就开始出现凝集素，而且出现高滴度凝集素或凝集素滴度不断上升，不仅有很高的诊断意义，同时也可作为判定疾病活动性指标。 目前，虽然出现了不少新的诊断布氏菌病的技术方法，但仍不能取代本试验方法，而这些新方法则是对本法的补充和完善。 但是，作为单一的诊断方法是不完善的。从国内外的研究资料表明，仅用凝集反应对畜群进行多次检查，仍有许多布氏菌病病畜检查不出来；对部分慢性期布氏菌病患者得不出阳性反应结果；还有一些其他疾病患者，在血清学上与布氏菌病存在交叉凝集反应，因而做本试验是难于排除的。因而有必要做多种血清学实验检查，以便综合性判定，获得正确结果。 除每份待捡血清需作1个血清对照，以排除血清的自然凝集外，每次试验尚需有1个抗原对照，以排除所用抗原的自然凝集。 试管凝集(莱特试验) 0.5ml抗原 试管凝集反应操作示意图 0.2ml血清 2.3ml盐水 0.5ml盐水 0.5ml弃去 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5