丹酰氯衍生化LCAPCI+MS法测定人血浆中超微量炔雌醇及其片剂人体药代动力学研究.pdf

第24卷增刊 分析测试学报 vt，l24 1些兰!! ：!!型竺!!!!竺!!!丝型坚塑竺竺!型些! !竺!竺 丹酰氯衍生化LC—APCIMS法测定人血浆中超 微量炔雌醇及其片剂人体药代动力学研究 谭文明1，丁黎1，杨劲2，张正行1 (1_中国药科大学药物分析教研室．江苏南京210009；2．中国药科大学药代中心，江苏南京210009) 复方醋酸环丙孕酮片(每片含醋酸环丙孕酮2 mg和炔雌醇35雌)可对女性发挥抗雄激素作用， 消除或减轻男性化及痤疮、多毛等皮肤症状。能显著地降低女性多囊卵巢综合症，并减小多囊卵巢 综合症病人的卵巢体积及缓解其临床症状。还有抑制排卵的作用，是女性口服避孕药之一。炔雌醇 的临床给药量很小(35斗g／片／天)，血浆中炔雌醇的浓度极低，外国文献报道其平均最高血药浓度 约为90 Pg·mL‘。；Kuhnz等采 Pg·mL～，其血药浓度测定常用放射免疫法，定量下限约为8～20 用cc—Ms法测定血浆中的炔雌醇，定量下限为lo MS只能榆测到 Pg·mL～。我们采用LC—ESI 30ng·mL“的炔雌醇甲醇溶液，远远达不到所需要的检测灵敏度。有将含有伯、仲氨基、酚羟基 的化合物经丹酰氯衍生化后进行荧光、电化学检测的报道。但是，丹酰氯作为衍生化试剂提高化合 物离子化效率而增强质谱响应却未见报道。本论文采用丹酰氯作为衍生化试剂与炔雌醇反应后进行 LC—APCI MS测定。衍生化后炔雌醇的质谱响应增大r300倍，定量下限为10．43pg／mL，满足了 药代动力学测定要求。 1 实验部分 1．1 仪器 1 Agilent100液相色谱一质谱联用仪；Agilem 仪器厂)；旋涡振荡混和器(上海医科大学仪器厂)。 ’．2药品与试剂 炔雌醇和对羟基联苯对照品(由浙江仙琚制药股份有限公司提供，纯度大于99．5％)；淑普靓 (浙江仙琚制药有限公司，批号：030701，规格：每片含醋酸环丙孕酮2mg和炔雌醇35斗g，受试 mg和炔雌醇 制剂)；达英一35(德国先灵有限公司，批号：528C，规格：每片含醋酸环丙孕酮2 35 钠、氢氧化钠(南京化学试剂一厂)；环己烷、乙酸乙酯、乙醚、丙酮为分析纯(南京化学试剂厂)； 水为去离子纯净水。 1．3实验方法 1．3．1 炔雌醇血浆样品的处理 于10mL玻璃离心管中精密加入血浆样品1mL，加入内标溶液 mL，旋涡3min，于 (20．02ng·mL。的对羟基联苯丙酮溶液)50斗L，旋涡混匀，加入乙酸乙酯5 3000 r·min“离心lorain。分取有机相于另一10mI。玻璃离心管中，于50℃水浴中以氮气流吹 rain，加入 干。提取物中加入100mmol·L“的碳酸氢钠缓冲液(pH10．5)100灿，加塞，涡旋1 3 min，于55℃水浴中反应50min，反应液于 mg·mL‘1的丹酰氯丙酮溶液100斗L，加塞，涡旋1 000 16 MS分析。 r·min“离心2min，直接吸取上清液60“L进行LC—APCI ODS rain×4．6 1．32炔雌酵的色谱与质谱条件色谱柱为Lichmspher5卜m，250 mm(淮阴汉邦 1 mL·min～：柱温：25℃；进样体积为60IL