课题多聚酶链式反应PCR扩增DNA片段.pptVIP

课题2 多聚酶链式反应(PCR)扩增DNA片段 1、多聚酶链式反应（PCR） 一、课题背景 2、应用： 遗传疾病的诊断、刑侦破案、古生物学、 基因克隆和DNA序列测定等各方面。 解决了什么问题？ 1、DNA分子的组成成分和结构 DNA分子的基本组成单位是 。共有 种,每个基本单位是由一分子的 、一分子的 、和一分子的 构成。 脱氧核苷酸 4 磷酸 碱基 脱氧核糖 二 、基础知识 （一）PCR原理 解旋酶 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物（RNA） 打开DNA双链 模板 合成子链原料 催化子链合成 使DNA聚合酶能从引物3′端开始连接脱氧核苷酸 变性（ 80-100℃ ） Taq酶（耐高温） 20—30个核苷酸构成DNA或RNA 体内DNA复制 体外扩增DNA 作用 2、DNA的复制 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA双链反向平行 3′ 5′ 5′ 3′ 复制方向：子链的5′端向 3′端延伸。 DNA双链 单链 变性（加热80-100℃ ） 复性（缓慢冷却） 3、DNA 分子的热变性原理： 变性的目的： 复性的目的： 解开（模板DNA）双链 有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ与两条（模板）单链的结合 （二）PCR的反应过程 每个循环包括： 变性 ——复性——延伸 5/ 3/ G—G T—C 3/ 5/ A—G C—C 5/ 3/ A—G 引物Ⅰ 5/ 3/ G—G 引物Ⅱ 变性（95℃） 复性（55℃） 延伸（72℃） 复制过程 5/ 3/ G—G T—C 5/ 3/ G—G T—C 5/ 3/ A—G 引物Ⅰ 5/ 3/ A—G 引物Ⅰ 5/ 3/ G—G 引物Ⅱ 5/ 3/ A—G 引物Ⅰ 3/ 3/ 5/ G—A C—C 3/ 5/ G—A C—C 5/ 3/ G—G 引物Ⅱ 5/ 3/ G—G 引物Ⅱ 5/ 3/ G—G 引物Ⅱ 3/ 5/ 3/ G—A 引物Ⅰ （1）PCR循环--变性 95℃变性 （1）PCR循环--变性 95℃变性 （1）PCR循环--变性 95℃变性 （2）PCR循环—复性 55℃复性 （3）PCR循环—延伸 （3）PCR循环—延伸 （3）PCR循环—延伸 （3）PCR循环—延伸 * * *