020细胞工程-第二章清洗与消毒概论.ppt

培养用品的清洗和消毒灭菌 一、清洗： 在组织培养中细胞对任何有害物质都十分敏感，因此对新的或用过的培养器皿均需严格清洗。 有害成分大多为：微生物、细胞碎片、非营养性化学成分。 1.玻璃器皿清洗： 玻璃器皿用于培养细胞、细胞冻存、培养用液的存放等。提供细胞生长的玻璃表面不但要清洗干净，而且要带适当的电荷。 苛性碱清洗剂会使玻璃表面带的电荷不适于细胞附着。需以HCl或H2SO4中和。 一般玻璃器皿的清洗分为4个步骤。 A：浸泡：首先清水浸泡，用以软化和溶解；再采用5%盐酸浸泡过夜； 新的玻璃器皿在生产过程中常使玻璃表面呈碱性，并带有一些如铅和砷等对细胞有毒的物质，采用酸处理可消除。 B:刷洗：一般多用毛刷和洗涤剂或洗衣粉洗涤，以去除器皿内外表面的杂质（防止损伤器皿表面，不留死角）。 C:浸酸：清洁液由浓硫酸、重铬酸钾及蒸馏水配制而成。具有很强的氧化作用，去污能力很强，对玻璃器皿无腐蚀作用。 清洁液：红棕色（有效）--绿色（失效） D：冲洗：玻璃器皿经浸泡后，第一步，使用流水彻底冲洗，每个器皿用流水灌满、倒掉，须重复十次以上，直至清洁液全部冲洗干净，不留任何残迹为止。 细胞培养物品清洗所需配制的清洁液强度通常为次强液。新配制的清洁液呈棕红色，经多次使用、水分增多或遇有机溶剂时变为绿色，此时表示清洁液已失效，应废弃而重新配制。 安全：配制过程中，应先将重铬酸钾完全溶解于蒸馏水中(必要时可加热帮助溶解)，然后缓慢加入浓硫酸。由于加入浓硫酸时将产生热量，因此配制的容器宜用陶瓷或塑料器皿。一般浸泡过夜，或至少为6h以上。 2.玻璃滤器： 玻璃滤器以烧结玻璃为滤板，固定在玻璃漏斗上。主要用于各种培养用液的过滤除菌，不宜单独过滤血清等粘稠液体，容易堵塞滤板小孔。 此种滤器只能连接真空泵在负压条件下抽滤，不能施加正压。 a．自来水漂洗：用洗衣粉掠洗(不得使用毛刷)过夜。 b．自来水抽滤3—5遍至无白沫，水滴滤过夜。 c ．清洁液抽滤1遍，清洁液滴滤过夜。 d．自来水漂洗抽滤5遍，水滴滤过夜。 e . 蒸馏水抽滤3遍，蒸馏水滴滤过夜。 f ．二蒸水抽滤2遍，三蒸水滴滤过夜，漂洗。 g．烤干备用。 3.胶塞、盖子等杂物： 清洗过程中，初次使用的胶塞因带有滑石粉，应先用自来水冲洗于净，再进行常规清洗； 使用后的胶塞、盖子应及时浸泡在清水中，然后用洗涤剂刷洗。 用蒸馏水漂洗2—3次,最后三蒸水漂洗1次。晾干备用。 4.塑料器皿： 用后立即以流水冲洗干净或浸入清水中，防止干涸。 超声波清洗机内加入少量洗涤剂清洗30 min,流水彻底冲洗干净； 清洁液浸泡过夜，流水彻底将残留清洁液冲洗干净，蒸馏水漂洗2—3次．三蒸水漂洗2次，晾干备用。 5.包装： 一般用皱纹包装纸、硫酸纸、牛皮纸、棉布等作为包装材料； 对培养瓶、滤器、存放培养液用贮液瓶、吸管和胶塞(或培养瓶盖子)等物品的容器瓶口部分做局部包装密封，再用牛皮纸、玻璃纸或布包起来备用。 培养用品的消毒灭菌 （二）消毒灭菌的方法 根据材料的要求可采用不同的消毒灭菌方法。总的说来有物理方法及化学方法两大类。 常用的滤器有以下几种 ①zeiss滤器：这种滤器为不锈钢的金属结构。中间央有一层石棉制成的一次性纤维滤板。滤板有一定的厚度，可承受一定的压力，因此是过滤血清等粘稠液体较理想的滤器。 ②玻璃滤器；这种滤器为玻璃结构，以烧结玻璃为滤板固定于玻璃漏斗上，可用于过滤除血清等粘稠液体以外的各种培养液体，只能采用抽滤式。根据滤板孔径的大小，分G1-G6六种规格型号，其中只有G5及G6可用以滤过除菌，一般都使用G6型。其缺点是速度较慢。 ?微孔滤膜滤器：这种滤器的基本结构与Zeiss滤器相同， 其中间为一种一次性的特制混合纤维素脂滤膜。 滤膜的规格很多，主要根据滤器的直径大小而划分其型号，可按待滤过的液体的量来选择适当的型号。 * 组织细胞培养工作中也可利用消毒剂进行灭菌处理， 第二章 清洗与消毒 方法：物理灭菌法+化学消毒法 1.物理灭菌法： A：紫外线法：无菌室、超净工作台大面积消毒。 B：高压蒸汽法：玻璃器皿、滤器、胶塞、解剖用具及耐热液体。 C：过滤除菌法：含不耐热成分培养基、试剂等。 2.化学消毒法：实验室、无菌室、物体表面消毒。 清洁液配制比例 二、消毒 玻璃培养瓶，移液管，试管等玻璃器皿？ 超净工作台台面？ 金属手术器械？ 不耐热的液体培养基和胰蛋白酶等？ 橡胶塞和塑料瓶盖等？ 细胞培养室？ 操作人员的手部？ 实验室桌面、地面等？ （一）重要概念 1.消毒：杀死物体上病原微生物的方法；并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物 2.灭菌：杀死物体上所有微生物的方法。