W2胶体过滤法.doc

 工作班儀器及組產表 儀 器 各班實驗桌面 分配 名 稱 數量 check 兩組 共用 單數組 電泳槽Mighty Small 1 電泳鑄膠器 1 分劃收集器 1 蠕動輸液幫浦 1 加熱攪拌器 1 震盪器 1 微量吸管架 1 雙數組 管柱C16×100 + adaptor 1 管柱C26×40 + adaptor 0 供電器 1 冰桶 1 5 L大燒杯 1 每 班 小烏龜離心機 1 果汁機 1 轉印槽Transphor 1 冷藏箱 (各班有固定貯位) 1 多 班 微量離心機 2 公用儀器及桌面 207 個人電腦及印表機 3+1 準 備 室 天平 (9.999) 3 天平 (9.99) 1 酸鹼度計 2 公 用 桌 水浴 2 ELISA光度計 1 看片箱 2 Lab 高速冷凍離心機 2 細胞離心機 2 旋轉台 (排煙櫃) 2 其他公用物品 在實驗室公用小桌上 鋁箔aluminum foil 公共 保鮮膜Saran wrap 公共 手套gloves (L, M, S) 公共 透析袋 (冷藏箱內) 公共 微量離心管tip 公共 個 人 用 具 組 產 表 分配 名 稱 數量 check 請 小 心 保 管 組 產 ， 結 業 後 如 數 交 還 。 自動吸管Autopipet P20 1 P200 1 P1000 1 吸管盒Tip case Yellow tip + case 1 Blue tip + case 1 電泳片組合 白板 2 玻璃板 4 樣本添加引導片 1 間隔條 (0.75 mm) 4 樣本齒模comb 2 定時器 1 馬克筆 1 標籤 1 文具夾 4 剪刀 1 鑷子 1 解剖刀及刀片 1 試管及方盒 2 試管架 1 微量試管架 1+1 微量試管盒 1 超微膜濃縮管Centriprep 0 浮船 1 透析夾 2 攪拌子 1 洗瓶 1 ELISA plate 5 乾片用玻片 1 塑膠染缸CBR 1 透明塑膠染缸 1 方型培養皿 1 鐵架及鐵夾 1 血清瓶 (各種大小) 5 W1 蛋白質抽取 這是本工作班的第一個實驗，我們將從甘藷塊根中分離澱粉磷解，以此來練習蛋白質的抽取方法，主要是先以硫酸銨這種中性鹽類把大部分的蛋白質沈澱下來。請先檢查以下的儀器及試劑，然後依照實驗步驟一步一步確實完成。 儀器用具 附註說明 製簽用具、果汁機 (均質機)、紗布 班 每班共用 高速冷凍離心機 (離心管) 全班 請依助教協調順序 燒杯 (100 mL)、冰筒、攪拌器、攪拌子 (或玻棒) 組 每組自行操作 大燒杯 (1 L)、透析袋、透析夾 組 每組自行操作 藥品試劑 附註說明 甘藷塊根 班 甘藷簽每班200 g X 緩衝液A (50 mM Tris, pH 7.4) 組 基本緩衝液 (不會用到) 緩衝液B (緩衝液A再加1% PVPP吸著劑) 班 300 mL PVPP 3 g/班 預先秤好 緩衝液C (緩衝液A含0.1 M NaCl) 全班 10 L×2桶, 4℃ (透析用) 硫酸銨22 g 組 實驗步驟 附註說明 以下 (1)~(2) 步驟由每班助教操作，製備一份後平分。 所有操作均得保持4℃。 (1) 取新鮮甘藷塊根，洗淨後去皮，製簽後秤重200 g，加入300 mL冰冷緩衝液B，使用果汁機在4℃下均質，高速攪拌1 min，停止冷卻1 min，重複5次。 早上先由助教取甘藷製簽；果汁機要提早預冷，均質化在冷箱內操作，防止溫度升高。 (2) 均質液以四層紗布過濾，取濾液離心30 min；收集上清液即得粗抽取液；每組請各取燒杯分得50 mL。 (1)~(2) 由助教一起操作，各組準備一250 mL燒杯及冰浴。 (3) 各組取50 mL粗抽取液，在冰浴下緩緩加入22 g硫酸銨，並以玻棒不時攪拌 (達到70% 飽和度)；加完後繼續攪拌平衡10 min後離心30 min。 ◆ 離心條件︰日立RPR-12, 8,000 rpm (4℃)；小心離心機的運作可能發生危險。 (4) 離心後收集沈澱，溶在5 mL的緩衝液C後，置於透析袋中對緩衝液C透析過夜。次日離心30 mi