菲急性毒理实验和腐植酸吸附转化菲的能力测定实验实施方案.doc

菲急性毒理实验和腐植酸吸附转化菲的能力测定实验实施方案 实验目的：①做毕业论文正式的实验；②探索。 实验地点：室实验时间：1实验用品： 1、养殖用品：个L养殖槽（其中个用来替换、消毒用），400L养殖桶1个，盛放毒液的15L水桶个，吸管若干； 2、仪器设备：烧杯，容量瓶，玻璃棒，移液枪，样品瓶，试剂瓶，分析天平，样品袋，口罩，一次性手套； 3、实验试剂：， 4、其他：养殖记录本，仔鱼死亡量统计表格，标签纸和胶带等。 实验步骤：毒：实验分组进行，每组3个平行(，其他条件如温度、操作、换水等均同)。 菲的浓度（μg/L） 腐植酸浓度(mg C/L) G0 0 0 G1 250 0 G2 500 0 G3 750 0 G4 1000 0 G5 1250 0 G6 750 5 G7 750 10 G8 750 15 G9 750 20 G10 750 25 重申规则： 为防止差错，每次配溶液前，务必先计算、记录、核对、再配母液与稀释、分到各组（桶、槽）。而且务必人同时操作，一人为主，人为辅兼校对，人同时在实验记录本上签名对该操作负责！ （一）母液的配制： 1、母液的配制： 2、不同浓度的腐植酸溶液的计算： 我们采用的（酒精下脚料制备的）腐植酸百分含量为11.79%，即1g中腐植酸的含量为11.79mg。（分析方法见万攸红. 容量法测定腐植酸的含量. 有色金属分析通讯,2001, 113:9-11.详见附件）；腐植酸中的碳含量为100g/L（分析方法见冯苍旭. 光谱法快速测定腐植酸C含量.中国地质,2010,37(3):831-834。详见附件）。用不同体积的液体腐植酸原液稀释可得不同浓度的毎升腐植酸浓度【计算备用，不配制溶液】： 5 mg C/L腐植酸解毒液的配制：每升海水中需添加0.05ml腐植酸； 10 mg C/L腐植酸解毒液的配制：每升海水中需添加0.1ml腐植酸； 15 mg C/L腐植酸解毒液的配制：每升海水中需添加0.15ml腐植酸； 20 mg C/L腐植酸解毒液的配制：每升海水中需添加0.20ml腐植酸； 25 mg C/L腐植酸解毒液的配制：每升海水中需添加0.25ml腐植酸。 3、母液的存放：一次可配制数毫升，并标记清楚，配好后存放于4℃的冰箱中以备后用。存放时，应注意与其他试剂的隔离，防止。 （二）液的：坚持逐级稀释原则Chena P J, Sua C H, Tsenga C Y, et al. Toxicity assessments of nanoscale zerovalent iron and its oxidation products in medaka (Oryzias latipes) fish. Marine Pollution Bulletin, 2011, 63(5-12):339-346]。首次配制的计算、配制具体过程如下(由1人负责计算后，务必经2人以上认真审核、校对配制毒液浓度）： 配制：首先计算好需要的，根据计算需要的母液体积，然后按照操作规范，准确量取母液，稀释配制。我们暂定的每个养殖槽放养仔鱼100尾，每组三个平行共计300尾，养殖密度为1尾/5ml，即每个槽盛放(菲毒液+特定浓度的腐植酸)6L。换水采用吸出多少，添加的原则。用移液枪准确移取mL Phe母液（0.8g/L）移到L容量瓶中，菲稀释液在稀释完之后放在通风厨中挥发1小时左右去除丙酮，再加入等体积的新鲜海水[赵作媛, 朱江, 陆贻通等. 镉-菲复合污染对蚯蚓急性毒性效应的研究[J]. 上海交通大学学报, 2006, 24(6): 553-557.]、L 250μg/L的：用移液枪分别准确移取mL 和2.5mL Phe稀释液（8mg/L）移到L塑料桶中，然后1000mL量筒mL和1000mL海水，再用2000mL烧杯准确量取海水mL菲稀释液mL海水= 18 L】，标记为“”，用玻璃棒充分搅匀，使用前再用玻璃棒搅匀。、L 500μg/L的：用准确移取mL 和125mL Phe稀释液（8mg/L）移到L塑料桶中，然后1000mL量筒mL海水，再用2000mL烧杯准确量取海水mL菲稀释液mL海水= 18 L】，标记为“”，用玻璃棒充分搅匀，使用前再用玻璃棒搅匀。、L 750μg/L的：用移液枪分别准确移取mL 和2.5mL Phe稀释液（8mg/L）移到L塑料桶中，然后1000mL量筒mL海水，再用2000mL烧杯准确量取海水mL菲稀释液mL海水= 18 L】，标记为“”，用玻璃棒充分搅匀，使用前再用玻璃棒搅匀。、L 1000μg/L的：用准确移取mL Phe稀释液（8mg/L）移到L塑料桶中，然后1000mL量筒mL和1000mL海水，再用2000mL烧杯准确量取海水mL菲稀释液mL海水=