四、实验方法.ppt

实验1 ?暗视野显微镜的使用与细胞器观察  一、实验目的 2.掌握暗视野显微镜的使用方法 二、实验原理 1.丁达尔现象 光通过浑浊媒质（烟、雾、悬浮液和乳状液等）时，浑浊介质所呈现的光的强烈的散射现象。暗视野显微镜是以丁达尔效应为基础，即以胶体粒子的反射和散射现象为基础而设计的。 二、实验原理 2.基本工作原理 应用丁达尔现象，使用特殊的聚光器，照明光线不能直接入射到物镜之内，使入射光线经聚光器斜向照明被检样品，利用样品表面的散射光和反射光进行观察。视野内所看到的图像不是透过样品的直射光线形成的，而是由被检样品表面所散射和反射的光形成的，所以暗视野中看到的是被检样品的衍射光图像，非物体本身。暗视野照明法是斜射照明法的一种。 二、实验原理 3.优点 这种照明方法能提高显微镜对微小物体的分辨能力，对大小在0.004μm以上的微小粒子，虽然看不清楚样品的细微结构，亦可清晰地分辨其存在和运动。 二、实验原理 4.缺点 由于暗视野照明法是利用被检样品表面散射的光层而观察物体的，所以，在黑暗的视场中只能看到被检样品的存在与运动，但不能辩清样品内部的细微结构。 三、实验用品 三、实验用品 四、实验方法 四、实验方法 四、实验方法 四、实验方法 四、实验方法 四、实验方法 四、实验方法 四、实验方法 四、实验方法 四、实验方法 四、实验方法 四、实验方法 四、实验方法 五、注意事项 1.制作暗视场光挡时，若光挡直径过小或光挡的中心位置不正，则不能全部挡掉直射光，视野不暗，样品与背景的明暗反差不明显；若光挡直径过大，聚焦到样品上的光线不足，使观察到的样品亮度不佳，影响观察效果。 五、注意事项 2.使用暗视场显微镜时，照明光源的照明强度要高，否则样品的反射光强度不够，影响观察效果。 五、注意事项 五、注意事项 4.载玻片和盖玻片应清洁无痕，否则照明光线会于其处发生漫反射而影响暗视场的照明效果。 五、注意事项 5.载玻片的厚度要适宜，照明光束经暗视场聚光器后，产生空心照明光锥，即中心为暗区。而反射光的焦点在聚光器上透镜表面之上，很短的距离。因此，载玻片的适宜厚度为0.8～1.2mm。 五、注意事项 6.物镜的数值孔径必须小于聚光器的数值孔径，否则会因物镜的孔径角大于暗视场聚光器所形成的照明光束中心暗区的角度，致使部分照明光线射入物镜，破坏或降低了暗视场的照明。 * * 1.了解暗视野显微镜的用途。。 3.学习利用中央挡光法自建暗视野的方法。 1.器具：普通复式光学显微镜、暗视野聚光器、载玻片、盖玻片、滤纸、镜头纸、滤色镜片、黑纸、圆规、直尺、剪子、铅笔、胶水。 2.药品：Ringer氏液或蒸馏水。 3.材料：洋葱。 1.暗视场聚光器安装。从聚光器座架上卸下明视场聚光器，然后将暗视场聚光器安装到位并固紧。 ㈠暗视场聚光器的使用 2.将被检样品的玻片标本置于载物台上，需用油浸的暗视场聚光器，要在聚光器上透镜与载玻片之间滴加香柏油，使之密接。 ㈠暗视场聚光器的使用 3.聚光器合轴调中。用低倍物镜对样品聚焦，随之用聚光器升降螺旋上下调节聚光器位置，当在暗视场中清晰地窥见一光环或圆形光点时，停止升降聚光器，用聚光器调中螺杆移动聚光器，使光环或光点调至视场中心位置。 ㈠暗视场聚光器的使用 4.调节聚光器焦点。转动聚光器升降螺旋，使视场中的光环调成一最小的圆形光点。此刻聚光器的焦点恰好位于样品处。 ㈠暗视场聚光器的使用 5、更换需用的高倍物镜进行镜检观察。 ㈠暗视场聚光器的使用 1.转动聚光器升降螺旋，使聚光器达到最高位置。 ㈡暗视场光挡的制作方法 2.用低倍物镜对样品聚焦。 ㈡暗视场光挡的制作方法 3.聚光器合轴调中。 ㈡暗视场光挡的制作方法 4.将欲使用的物镜旋入光路，然后对样品聚焦。 ㈡暗视场光挡的制作方法 5.取出一个目镜。过目镜筒向下观察，在物镜透镜中的后焦面处，可见聚光器孔径光阑的影像。往复旋转孔径光阑调节环或拨动调节杆，使孔径光阑开孔的内缘与物镜孔径的内缘完全重合时为止。 ㈡暗视场光挡的制作方法 6.根据所测得的直径，用黑纸制作暗视场光挡，粘贴于滤色镜中央部位并放于滤色镜支架上（黑纸朝下），检查暗视野效果并进行调整，使光挡的中心准确地位于显微镜光轴的轴心部位。 ㈡暗视场光挡的制作方法 7.制洋葱鳞茎表皮装片。 ㈡暗视场光挡的制作方法 8.暗视野观察。仔细观察和辨认洋葱鳞茎表皮细胞中各种细胞器。 ㈡暗视场光挡的制作方法 3.若视场中样品与背景明暗反差不强时，可以上下调节聚光器的位置，使视场内的反差提高。 * * * * *