第11章,色谱分析法,修改讲解.ppt

流动相的强度和选择性 溶剂的极性（强度） 正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强 反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 溶剂的选择性 不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故选择性不同 混合溶剂（二元或多元流动相） §4、高效液相色谱法 溶剂的种类 正相：正己烷、正庚烷、乙醚、二氯甲烷、氯仿等，己烷为主体，加入质子接受体乙醚或甲基叔丁基醚，质子给予体氯仿，偶极溶剂二氯甲烷 反相：水、甲醇、乙腈、四氢呋喃、乙醇及其混合物等，以水为主体，加入质子接受体甲醇，质子给予体乙腈，偶剂溶剂四氢呋喃。 §4、高效液相色谱法 正相色谱 反相色谱 固定相 极性 非极性 流动相 非极性 极性 溶质分子与固定相作用力 极性作用力（偶极、氢键）“强烈” 色散力（非选择性）“微弱” 溶质分子与流动相作用力 色散力（非选择性） 极性作用力（偶极、氢键） 极性溶质 保留时间随极性增大而增大 小或难保留 非极性溶质 小或难保留 可保留，保留时间随极性减少而增大 §4、高效液相色谱法 2. 液固色谱法 (1) 分离原理 以固体吸附剂为固定相、液体为流动相的液相色谱法。 由于溶质分子和流动相分子在吸附剂表面的吸附活性中心上进行竞争吸附，这种竞争吸附形成不同溶质在吸附剂表面的吸附、解吸平衡。平衡常数的不同导致不同溶质得以分离。 §4、高效液相色谱法 非极性固定相：活性炭、高分子多孔微球、碳多孔微球等 原理：吸附+分配，蒹小孔凝胶作用 特点：柱选择性好，峰形好，柱效低 适用：分离弱极性化合物 （2）固定相 极性固定相：硅胶、氧化镁、氧化铝等 原理：吸附 特点：峰易拖尾 适用：分离极性化合物 §4、高效液相色谱法 硅胶为固定相时：以弱极性的正构烷烃为主体，加入二氯甲烷等中等极性溶剂调节合适的洗脱强度。 可用水对硅胶进行减活处理，或加入四氢呋喃、乙腈、甲醇、异丙醇等改性剂 （3）流动相 §4、高效液相色谱法 (4) 应用 中等分子量的油溶性样品如油品、脂肪、芳烃等 不同极性取代基的化合物 结构异构体和几何异构体混合物的分离 §4、高效液相色谱法 3. 离子交换色谱法和离子色谱法 §4、高效液相色谱法 (1）分离机理 试样离子与离子交换树脂上的离子发生反应： 阳离子交换：R-SO3-H++M+=R-SO3-M++H+ 阴离子交换：R-NR3+Cl-+X-=R-NR3+X-+Cl- 不同的离子与树脂离子的交换能力（亲和能力）不同，亲和力越大，离子越难洗脱，从而得以分离。 （2）固定相 离子交换树脂，根据功能基分为 强酸型（磺酸基团） 强碱型（季铵基） 弱酸型（羧酸） 弱碱型（伯、仲、叔胺） §4、高效液相色谱法 （3）流动相 双柱抑制型：分离阳离子，一般采用无机酸如HCl，HNO3等；分离阴离子，一般采用NaOH、NaHCO3/NaCO3。 单柱非抑制型：分离阳离子，用低浓度的HCl，HNO3等；分离阴离子，可用苯甲酸及其盐、酒石酸、柠檬酸等 §4、高效液相色谱法 ? （4）应用 分析无机阴离子的首选方法 还可用于分析无机阳离子，有机酸、碱，糖类、蛋白质等。 §4、高效液相色谱法 4. 体积排阻色谱法（SEC） 小分子扩散到凝胶空隙中，出峰最慢； 中等分子通过部分凝胶空隙，中速通过； 大分子被排斥在外，出峰最快； 溶剂分子小，最后出峰。 §4、高效液相色谱法 (1) 分离原理 以多孔凝胶为固定相，利用凝胶的孔径，使样品中不同分子大小的组分得以分离。可分离相对分子质量在100-105范围内的化合物，分离分子大小差要大于10%。 分离原理示意图 §4、高效液相色谱法 §4、高效液相色谱法 使用水溶液的凝胶过滤色谱法（GFC），主要用于分析多肽、蛋白质、核酸、多糖等。 使用有机溶剂的凝胶渗透色谱法(GPC)，主要用于高聚物（如聚乙烯、聚氯乙烯等）分子量的测定 (2) 分类 （3）固定相 软质凝胶：如交联葡聚糖等，水相分离生化体系，适于低、中压操作 半刚性凝胶：较高交联度的苯乙烯、二乙烯苯共聚物，有机相洗脱，可承受10Mpa的压力 硬质凝胶：高交联度苯乙烯、二乙烯苯共聚物：凝胶渗透色谱法 多孔球形硅胶：凝胶过滤色谱法、凝胶渗透色谱法 羟基化聚醚多孔微球：凝胶过滤色谱法 §4、高效液相色谱法 ? （4）流动相 改善分离主要通过固定相来实现。流动相的选择原则是：溶解样品、与凝胶浸润、与检测器匹配、粘度小。如四氢呋喃；缓冲溶液 §4