基因诊断与基因治疗剖析.ppt

* 四. 基因诊断的临床应用 (一) 遗传病的基因诊断 (二) 肿瘤的基因诊断 (三) 感染性疾病的基因诊断 * 举例： ——镰刀状红细胞贫血 β－珠蛋白基因的第六个密码子A→T ↓ 表达产物：谷氨酸→缬氨酸 一个碱基突变→缺失1个MstⅡ内切酶位点 正常人： 1.1kb 患者： 1.3kb * 5’ 3’ 5’ 3’ 1.1 kb 1.3kb Mst II酶切位点（CCTNATG） 正常基因 突变基因 1.3kb 1.1kb 0.2kb 1 2 3 1、正常人 2、突变携带者 3、患者 * 第二节 基因治疗 基因治疗的概念 基因治疗的总体策略 基因治疗的基本程序 基因治疗的现状与展望 * 一、基因治疗概念 狭义概念 用具有正常功能的基因去置换或增补患者体内有缺陷的基因，从而达到治疗疾病的目的。 广义概念 将某种遗传物质转移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，最终达到治疗疾病的目的。 * 二、基因治疗的总体策略 基因矫正 基因置换 基因增补 基因失活 “自杀基因”的应用 免疫基因治疗 耐药基因治疗 * （一）基因矫正（gene correction） 对于致病基因中的异常碱基进行精确修复，使其恢复正常功能。 （二）基因置换(gene replacement) 用正常基因在原位替换致病基因，使细胞DNA完全恢复正常状态。 * （三）基因增补*(gene augmentation) 将正常基因导入患者体细胞内，使其整合到染色体中一起表达，以补偿缺陷基因的功能 （但致病基因未去除）。 （四）基因失活(gene inactivation) 指将特定的反义核酸导入细胞，通过碱基互补作用与mRNA结合，阻断肿瘤细胞中基因的异常表达，以抗肿瘤、抗病毒。 反义RNA: 干扰mRNA的互补RNA; 反义DNA: 干扰DNA的互补DNA. * （五）“自杀基因”的应用 自杀基因(suicide gene) 这种基因导入受体细胞后可产生一种酶，它可将原无细胞 毒性或低毒药物前体转化为细胞毒物质，将细胞自身杀死，这种 基因被称为“自杀基因”。 如果将自杀基因导入肿瘤细胞，则可将肿瘤细胞杀死。 但对正常细胞则无伤害作用。 * （六）免疫基因治疗 将某些细胞因子（IL-2、GM-CSF等）基因导入肿瘤患者体内，以增强患者的抵抗力。 （七）耐药基因治疗 在肿瘤化疗过程中， 把产生抗药物毒性的基因导入患者体内，从而使患者能耐受更大剂量的化疗。 * 三、 基因治疗的基本程序 （一）治疗性基因的获得 在了解疾病发生的分子机制基础上， 选择对疾病有治疗作用的特定基因。 如，对单基因缺陷遗传病，可用野生型（非突变）基因即可用于治疗； 对于肿瘤，最好选择某些与该类肿瘤密切相关的癌基因或抑癌基因用于基因治疗。 治疗性基因获得的方法很多： 用酶切或探针杂交法从基因组DNA文库获得，从cDNA文库获取，PCR扩增，人工合成等。 * （二）基因载体的选择 基因治疗关键步骤之一，是将治疗基因高效转移 入患者体内、并能调控其适度表达。 常用的载体有两类：病毒载体和非病毒载体。 病毒载体：逆转录病毒载体， 腺病毒载体， 腺相关病毒载体等； 非病毒载体： 与病毒载体的主要区别在于：采用理化方法