多聚酶链式反应扩增DNA片段2014年3月浅析.ppt

5.2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 （1）PCR循环--变性 （1）PCR循环--变性 （2）PCR循环—复性（退火） （3）PCR循环—延伸 （3）PCR循环—延伸 * DNA 指纹是从血液或其他组织中提取基因的 DNA ，用特定方法把 DNA 切割成很多长短不 等的片段，把这些片段通过电泳的方法按长短分开，然后转移，固定和杂交 . 这些杂交的片 段可以通过放射自显影或染色处理显示出来， 形成图谱， 一般包含 15-30 条带 ( 即杂交片段 ) ， 肉眼可辨 . 不同个体的图谱是不同的， 就像人的指纹一样互不相同 . 而同一个体的不同生长发 育阶段和不同组织的 DNA 指纹是相同的 . 所以，它既有高度的个体的特异性，同一个体又是 一致和稳定的 . 从一滴血，一根毛发，精液，几个皮细胞等小样品，甚至从鼻中黏膜，唾液， 长久的尸骨都能随时做 DNA 指纹分析 .? DNA 指纹是从血液或其他组织中提取基因的 DNA ，用特定方法把 DNA 切割成很多长短不 等的片段，把这些片段通过电泳的方法按长短分开，然后转移，固定和杂交 . 这些杂交的片 段可以通过放射自显影或染色处理显示出来， 形成图谱， 一般包含 15-30 条带 ( 即杂交片段 ) ， 肉眼可辨 . 不同个体的图谱是不同的， 就像人的指纹一样互不相同 . 而同一个体的不同生长发 育阶段和不同组织的 DNA 指纹是相同的 . 所以，它既有高度的个体的特异性，同一个体又是 一致和稳定的 . 从一滴血，一根毛发，精液，几个皮细胞等小样品，甚至从鼻中黏膜，唾液， 长久的尸骨都能随时做 DNA 指纹分析 .? DNA指纹技术在法医学鉴定中的应用 由犯罪现场残留的血、精液、唾液、毛发等成分提取的DNA指纹与嫌疑犯的DNA指纹对照。 谁是凶手？ 英国遗传学家Jefferys通过DNA分子生物学实验方法获得了一系列可以在胶片上看到的图纹，这些图纹极少有两个人完全相同，与人的指纹一样是每个人所特有的.故称为“DNA指纹” 1、将毛发、血痕、精斑、人体组织或白骨等所含的DNA提取出来 2、将DNA样品进行PCR扩增。 3、选用与探针配对的限制性核酸内切酶，在长链DNA位置上加以切割，将分子量很大的DNA长链切成许多长度不同的小片段 。4、在胶板尺寸较长的凝胶电泳仪中，对酶解完全后的DNA片段进行电泳，各酶切片段就会按其长度大小在电场中进行分离。 5、先用碱性溶液使凝胶板中分离开的双链DNA片段变性为单链片段，然后将凝胶板夹在尼龙膜中，并永久性地固定在尼龙膜上。 6、让放射性DNA探针与尼龙膜上的单链DNA片段进行杂交。 DNA指纹还用于亲子鉴定、空难事故受难者残骸鉴定等。 山西省公安厅24小时出结果，100%准确 应用： 的诊断、 、 、 和 DNA 等各方面。 遗传疾病 刑侦破案 基因克隆 序列测定 了解应用 理解原理 放什么物质？创设什么条件？为什么？ 古生物学 PCR美国科学家穆利斯(K.B.Mullis)1988提出的体外以极少数的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA的方法。1993年获诺贝尔奖。解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。 快速、高效、灵活、易操作。 特点： Plymerase Chain　ｒｅａｃｔｉｏｎ DNA分子的-OH端为3/ ; 磷酸基团的末端为5/ 3’ 3’ 5’ 5’ 一、基础知识（一）PCR原理 1、细胞内DNA的复制 （1）DNA由两条反向平行的脱氧核苷酸长链盘旋而成的。 ？ 两个脱氧核苷酸通过3-5磷酸二酯键连接 识别 解旋： 形成子链: 解旋酶催化，氢键断裂 以母链为模板，在DNA聚合酶的催化下，利用游离的脱氧核苷酸进行碱基配对 母链 子链 子代DNA 1、细胞内DNA的复制 （2）复制所需的物质及作用： 方向？还需什么物质？ DNA聚合酶特性？作用？ 引物？ （３）子链形成 不能从头开始合成子链，只能催化从引物的游离3’一OH上连接脱氧核苷酸形成磷酸二酯键。 按5’→3’的方向延长。 一小段单链的DNA或RNA，能与母链的一段碱基序列互补配对。通常为20—30个核甘酸 方向？ 引物 DNA聚合酶 1、细胞内DNA的复制（小结） 模板 亲代DNA 解开双链 解旋酶 子链形成 DNA聚合酶 引物 原料 四种脱氧核苷酸 能量 ATP 过程及需要的物质？ 高温为什么能使DNA解旋？ 耐高温的DNA聚合酶如何筛选？ 引物结合、 DNA聚合酶最适温度是