高效液相色谱及其应用浅析.ppt

高效液相色谱法及其应用 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) 王小云 2011-04-22 高效液相色谱简介 高效液相色谱特点 高效液相色谱分类 高效液相色谱应用 高效液相色谱发展 高效液相色谱简介 20世纪初： 俄国植物学家茨维特提出经典液相色谱法。经典液相色谱法包括柱色谱、薄层色谱、纸色谱。 20世纪60年代末： 　　　随着色谱理论的发展、高效细微固定相的开发、高压恒流泵及高灵敏度检测器的应用，高效液相色谱法得到了突破性的发展。 高效液相色谱的特点 高压：流动相流经色谱柱时，受阻力较大，为了迅速通过色谱柱，必须对流动相加高压。 高效：分离效能高，柱效达2×103-5×104块/m。 高灵敏度：最低可检测10-9g（ppb），痕量分析时可达10-12g(ppt)。 应用范围广：约80%的有机物，特别是高沸点、大分子、热稳定性差的有机化合物。 分析速度快：通常分析一个样品在15-30分钟，甚至有的样品在5分钟内即可完成，一般小于1小时。 高效液相色谱法局限性 成本高 易污染环境 缺少通用型检测器 不能代替气相色谱，无法完成柱效高达10万块理论塔板数的分析 不能代替中低压柱色谱法 高效液相色谱分类 吸附色谱法 分配色谱法 离子交换色谱法 体积排阻色谱法 高效液相分析方法的建立 收集样品信息，明确分析目的和要求 选择样品制备方法 确定分析模式，选择相应色谱柱 确定检测方法和条件 优化分离条件 方法验证 定量分析 样品前处理技术 高速离心 过滤、超滤 选择性沉淀 萃取 索氏抽提 衍生化反应 样品浓缩—旋蒸等 新技术—加速溶剂萃取（ASE） 高效液相色谱的应用 食品工业中的应用 在制药工业中的应用 在环境监测中的应用 在生物工程和生物化学中的应用 在精细化工分析中的应用 营养成份分析 氨基酸、碳水化合物、维生素等 食品添加剂 防腐剂、香料、保鲜剂等 有害成分 兽药残留、农药残留等 无机成份 各种无机盐 在制药工业中的应用 药物鉴别 如：青霉素中有效成份可用反相色谱法分离 杂质检测（原料、中间体、副产物等） 含量测定 手性分离 药物代谢动力学研究、临床血药浓度等检测中应用非常广泛 在环境监测中的应用 多环芳烃的检测（有机燃料未完全燃烧产生） 多氯联苯（PCB）的检测 农药残留的检测（有机磷、氯、除草剂等） 酚类和胺类的检测（化工、燃料、制药等产生的工业废水） 在生物工程和生物化学中的应用 氨基酸、多肽和蛋白质的分析研究 核碱、核苷、核苷酸和核酸的分析研究 生物胺的分析研究 变性高效液相色谱检测法（DHPLC）是近年来发展起来的一项相对较新的技术，主要应用于基因突变分析中，能够满足大规模的基因变异检测筛查。 在精细化工分析中的应用 醇、醛和酮、醚的分离分析 酸和酯的分离分析 表面活性剂的分析 聚合物的分析研究 高效液相色谱的发展 超高效液相色谱（UPLC） waters从上世纪60年代首推第一台液相色谱，到70年代液相色谱商业化，至2004年UPLC系统推出，一直是行业领导者。 UPLC的特点 超强分离能力（1.7um颗粒） 超高速度（压力可达105MPa） 超高灵敏度 简便方便的方法转换 快速自动进样（采用针内针） 最佳的质谱接入口 UPLC的特点及应用 UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍 UPLC主要应用于代谢组织学分析、环境监测及其他一些生化领域，包括天然产物的分析 。特别是中药研究领域的发展是一个极大的促进。 UPLC是HPLC的未来 高效液相-质谱联用（LC-MS） 色谱的优势在于分离，质谱能够提供物质的分子量及结构信息。液质联用体现了色谱和质谱优势的互补，将色谱对复杂样品的高分离能力，与MS具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来。 LC-MS特点 分析范围广 分离能力强。通过MS的特征离子质量色谱图能分别给出各组分的色谱图来进行定性定量； 定性分析结果可靠。可以同时给出每一个组分的分子量和丰富的结构信息； MS具备高灵敏度。检测能力提高一个数量级以上； 分析时间快。LC-MS使用的液相色谱柱为窄径柱，缩短了分析时间，提高了分离效果； 自动化程度高，LC-MS具有高度的自动化。 液质联用应用领域 生化方面的分析研究 天然产物分析研究 药物和保健食品的分析研究 环境检测的分析研究 化工行业分析研究 * * （三高一广一快） 按分离原理分类： 正相色谱 反相色谱 食品工业中的应用 超高效液相色谱（UPLC） 联用技术（LC-MS，