薄层色谱法(TLC)范例.pptx

薄层色谱法(TLC) 班级：药物化学 姓名：XXX 日期：2016.10.22 课程：现代分离技术 一、定义： 薄层色谱：常用TLC表示，又称薄层层析，属于固－液吸附色谱。原理是利用混合物中各组分吸附或溶解性能的不同，达到分离的效果。另一方面若在制作薄层板时，把吸附层加厚，将样品点成一条线，则可分离多达500mg的样品。 二、特点及应用原则： 1、薄层色谱的特点：　 灵敏度及分辨率高、分离快速、操作方便、同时分离多个样品、样品预处理简单、设备简单。 2、展开剂体系的选择： 一般展开剂体系选择如下：根据分离样品性质、薄层色谱板性质选择一个二元溶剂体系，通过调节溶剂比例以寻求适合Rf值。 三、仪器与材料 1、薄层板 2、点样器 3、展开容器 4、显色设备 5、色谱检视装置 1、薄层板 1.1薄层板分类 自制薄层板 普通薄层板和高效薄层板 硅胶GF254、氧化铝、纤维素、聚酰胺薄层板和C18键合相、氨基键合相、腈基键合相、二醇基键合相薄层板(固定相类型分类) 1.1.1自制薄层板: 须能保证色谱质量；对薄层板需特别处理和化学改性可用；节约成本。 玻璃板要求：表面光洁、平整，厚1-2mm，洁净。 规格：10cm×10cm、10 cm×15cm、10 cm×20cm、20 cm×20cm 1.1.2薄层板的自制方法： 1、初步溶解CMC钠盐（0.5%-0.8%） 2、恒温再次溶解 3、离心或抽滤（取上清液） 4、溶解硅胶（1:3）注：超声溶解。 5、涂布 6、晾干活化 2、固定相： 最常用固定相： ⑴硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254； ⑵氧化铝； ⑶硅澡土； ⑷纤维素等。 吸附剂：直径10-40μm 黏合剂：0.2%-0.5%羧甲基纤维素钠、10%-15%煅石膏、淀粉、有机高分子聚合物、特殊要求可用缓冲液、稀碱液等。 3、点样器 毛细管 微量注射器 半自动及全自动点样器 4、展开容器 专用平底或双槽展开缸、盖能密闭 特殊水平展开缸 5、显色设备 喷雾显色：玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，用压缩气体可使试剂呈均匀细雾状喷出 浸渍显色 蒸气熏蒸显色 显色剂的要求： ⑴至少可以把微克级的被分离物质显示出来； ⑵能给出一个确定的显示区域； ⑶显示区域有一定的稳定 性。 显色剂可以分成两大类： 一类是检查一般有机化合物的通用显色剂； 另一类是根据化合物分类或特殊官能团设计的专属性显色剂。 常用通用显色剂 显色剂 呈现颜色 硫酸-水；硫酸-乙醇 不同有机化合物显不同颜色 0.5％碘的氯仿溶液 显黄棕色 中性0.05％高锰酸钾溶液 显黄色 碱性高锰酸钾试剂 显黄色 铁氰化钾-三氯化铁试剂 还原性物质显蓝色，再喷2mol／L盐酸溶液，则蓝色加深。 5％磷钼酸乙醇溶液 还原性化合物显蓝色，再用氨气薰，则背景变为无色。 专属性显色剂 显色剂 适用化合物 硝酸银／过氧化氢 卤代烃类 荧光素／溴 不饱和烃 四氯邻苯二甲酸酐 芳香烃 甲醛／硫酸 多环芳烃 3，5一二硝基苯酰氯 醇类 品红／亚硫酸 醛基化合物 硝普钠／铁氰化物 肪族含氮化物 四、操作方法： 点样 形状：圆点状、窄细条状 点样位置：距底边1-1.5cm、圆点直径不大于0.3cm、条带宽0.5-1.0cm 样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。 展开 以直立展开为多 展开剂用量：展开后仍留有三分之二以上体积为宜；浸入展开剂的深度以距原点0.5cm为宜； 展开距离：8-15cm 溶剂蒸气预饱和：15-30分钟 展开系统的饱和 一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽量轻、快 五、注意事项 用涂布器制板的要点：玻璃板要清洁；调浆要均匀；涂布后的薄层板应低温缓慢干燥。 自制薄板要求：表面均匀、平整、光滑，无麻点、无气泡、无破损、无污染。 薄层厚薄对Rf值影响：硅胶G板当厚低于150μm时， Rf值随薄层的减低而增大，可变性大；板厚250 μm ， Rf改变不显著。 混合展开剂通常不能重复使用： ⑴低沸点物质蒸发比高沸点多 ⑵湿度变化 ⑶其中一种溶剂被优先吸附 ⑷各组分间可能发生相互作用 ⑸吸附剂中杂质不断流出引起组成改变 谢谢！