- 1、本文档共26页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
高温菌的纯种分离与鉴定
汇报人:赵影
汇报内容
实验内容
实验结果及分析
实验后期工作
实验内容篇
接着上次的实验结果,老师给的样品{DSM88固体培养基,温度70度,PH7.0}培养长出了菌株
对菌株进行纯种分离 :在培养出的菌株中挑选了10个单菌落{从菌落特怔看为不同的菌种}进行培养,多次划线,直到长出的菌为纯种菌
对得到的10种菌进行斜面保藏及革兰染色观察它们的形态结构{对部分菌进行了芽孢染色}
实验结果篇
10种菌的菌落特征及形态结构(革兰染色,单染色)
2号菌革兰染色图片
2号菌单染色图片
3号菌革兰染色图片
3号菌单染色图片
4号菌革兰染色图片
4号菌单染色图片
5号菌革兰染色图片
5号菌单染色图片
6号菌革兰染色图片
6号菌单染色图片
7号菌革兰染色图片
7号菌单染色图片
8号菌革兰染色图片
8号菌单染色图片
9号菌革兰染色图片
9号菌单染色图片
10号菌革兰染色图片
10号菌单染色图片
实验结果分析篇
对挑取的9种样品进行多次重复划线
内容2 菌种的分子鉴定
细菌 的DNA提取: 实验原理:苯酚 氯仿提取DNA是利用酚是蛋白质的变性剂,反复抽提,使蛋白质变性。SPS将细胞膜裂解,在蛋白酶K,EDTA的存在下消化蛋白质或多肽或小肽分子,核蛋白变性降解,使DNA从核蛋白中游离出来,DNA溶于水,不溶于有机溶剂,蛋白质分子表面带有亲水基团,也容易进行水合作用,并在表面形成一层水化层,使蛋白质分子能顺利进入到水溶液中形成稳定的胶体溶液,当有机溶液存在时,蛋白质的这种胶体稳定遭到破坏,变性沉淀,离心后有机溶剂在试管底层(有机相),DNA存在于上层水相中,蛋白质则沉淀于两项之间,酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白质,氯仿的作用是有助于水相与有机相分离和除去DNA溶液中的酚。抽提后的溶液用2倍体积的无水乙醇在乙酸钠存在下沉淀DNA。回收DNA用70%乙醇法洗去DNA沉淀中的盐,真空干燥,用TE缓冲液溶解DNA备用。
内容2
实验步骤:1、挑米粒大小菌体+50微升溶菌酶+460微升1×TE,放入37℃摇床2小时以上(注意摇菌时离心管要横放)
2、20%SDS50微升+Pk5--10微升震荡混匀,放入55℃烘箱30~60min
3、550微升苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)震荡混匀,12000rPm离心10min,吸取上清(不吸到中间渣滓,反复抽提2次)
4、上清液+2倍上清液体积无水乙醇+0.1倍体积的乙酸钠,室温放置10min以上;
5、12000rPm离心10min,去上清,用70%乙醇轻摇洗盐1~2次,再次离心5min,弃乙醇
6、37~55℃干燥后(确保乙醇完全挥发干净,防止影响PCR),加水保存备用
50mi 加热使其溶解 定容
TE配制方法:(用于悬浮和贮存DNA)
配制100ml溶液各成分用量
1ml 1mol/L Tris-HCL (pH7.4-8 , 25℃)
200ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
水98.8ml
Tris-HCL缓冲液配制:
将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH(25℃下)加一定量的浓盐酸,用水调至终体积1L
浓盐酸体积(ml) pH
70ml 7.4
60ml 7.6
42ml 8.0
0.5mol/LEDTA配制:
93.05gEDTA.Na2+10gNaOH
注:加固体NaoH调pH为8左右固体完全溶解。
20%SDS(50ml)
称取SDS固体10g加去离子水50mi 加热使其溶解 定容
您可能关注的文档
最近下载
- 精品解析:2023-2024学年浙江省温州市乐清市统编版六年级上册期末考试语文试卷(解析版).docx VIP
- 浙江省温州市乐清市2023-2024学年三年级上学期语文期末试卷 解析版.docx VIP
- 研讨会(一):战略设计的思维、方法与实践 30Aug2011 LY-BEI-C.pptx VIP
- 彩云追月完整版本.ppt VIP
- 2023年济宁医学院临床医学专业《病理学》科目期末考试卷B.docx VIP
- 《环境监测技术》课程标准.doc VIP
- 浙江省温州市龙湾区2023-2024学年四年级上学期语文期末试卷 解析版.docx VIP
- 东瑞制药搬迁项目环评报告(全本公示版).pdf
- 24DX002-1建筑电气与智能化通用规范图示.pdf VIP
- 五年级语文上册课外必读书《非洲民间故事》练习题及答案全.pdf VIP
文档评论(0)