高效液相色谱柱范例.pptx

高效液相色谱柱 姓名： 专业： 2017-4-9 1 材料与化学化工学院 目录 CONTENT 2017-4-9 2 材料与化学化工学院 1 色谱柱的结构与特征 2017-4-9 3 材料与化学化工学院 一 色谱柱的结构与特征 2017-4-9 4 材料与化学化工学院 1.1 色谱柱的类型 2017-4-9 5 按照分离规模及色谱柱的几何参数可以分为：制备柱、分析柱、微型柱等。 按照色谱柱中流动相的流向不同可分为：纵向柱、径向柱、锥形柱等，通常在无特殊说明的情况下所说的色谱柱皆指纵向柱，径向柱和锥形柱一般在制备色谱中应用。 柱型 柱内径（mm） 流动相流速 样品容量 制备柱 101.6 960ml/min 2.5g 制备柱 50.8 240ml/min 600mg 制备柱 25.4 61ml/min 150mg 半制备柱 9 11ml/min 25mg 常规柱 4.6 0.5～2.0ml/min 0.2～7mg 细内径柱 2.1 0.2～0.4ml/min 0.05～0.2mg 微柱 0.8～1.0 25～60μl/min 50～500μg 毛细管柱 0.1～0.5 1～15μl/min 1～50μg 纳米柱 ≤0.5 ≤1μl/min ≤1μg 材料与化学化工学院 1.2 一般色谱柱的结构 2017-4-9 6 HPLC色谱柱大多是用内壁经高度抛光处理的直不锈钢管，不锈钢可用于所有有机溶剂与大多数水性缓冲液。但是含氯的流动相会缓慢的腐蚀不锈钢材质（尤其在低PH值时）所以使用该类型流动相时应小心。也有用玻璃、玻璃衬里不锈钢与塑料制作的商品柱，用于可能与不锈钢发生反应的特殊样品。 筛板是色谱柱中非常重要的部分，它的主要作用是封闭色谱柱的两头，防止填料微粒流失，一般是用具有特定粒度的不锈钢或者镍粉末在模型中烧结而成，颗粒间隙即为筛板的孔，筛孔应小于填料的直径，一般5 μm和3 μm的微粒分别用2 μm和0.45 μm孔径的筛板。 材料与化学化工学院 1.3 一般制备柱的结构 2017-4-9 7 这种色谱柱可用于大规模复杂样品的分离和制备，由于制备型色谱柱体积和重量都较大，使用过程中必须小心。这种色谱柱的两端结构完全一致，故用户可以自行确定色谱柱的入口和出口；一旦确定入口和出口后，使用过程中非特殊原因不要颠倒，否则易造成两端填料同时污染，不利于维护。 材料与化学化工学院 1.4 液相色谱锥形柱与锥尾柱 2017-4-9 8 锥形柱：与传统的圆柱形柱不同，锥形柱是内径渐变的，导致流动相的线速度在柱内加速运动。内径渐变小的加速度为正，反之则反。制备级色谱的进样量一般是过载运行，导致分离效率下降，产品的纯度受到损失.样品的质量过载通常在色谱柱的人口处发生，在样品沿色谱柱向下流动过程中，由于流动相在色谱柱中对样品的稀释效应， 质量过载情况会逐步减弱.大入口锥型柱由于柱子入口处截面积较大，在柱容积相同的条件下，对样品的负载能力大于圆柱型柱，在相同的进样量时，柱效损失较小。 锥尾柱：在制备液相色谱中，色谱柱内径较大，而连接管线的内径较小，从大直径直接过渡到小直径，流体易产生涡流分散和局部滞留，柱效降低.锥型柱尾内径逐渐减小，避免了上述问题，很多的制备色谱柱都采用锥 型柱尾. 材料与化学化工学院 1.5 径向色谱柱 2017-4-9 9 径向色谱柱采用径向流动技术，样品和流动相沿径向流动（而不是如传统色谱柱即轴向色谱柱，样品和流动相是从柱的一端流向另一端），可以从柱的周围流向柱圆心，也可以从柱圆心流向柱的周围。一般结构的径向柱中，通常采用从柱的周围流向柱圆心的方式。 材料与化学化工学院 2 色谱柱填料与固定相 2017-4-9 10 材料与化学化工学院 二 色谱柱填料与固定相 2017-4-9 11 2.1 柱填料特性 2.2 硅胶微粒 2.3 多孔聚合物 2.4 键合硅胶 2.5 新型HPLC固定相 2.5.1 高稳定性化学键合硅胶固定相 2.5.2 有机-无机杂化基质固定相 材料与化学化工学院 2.1 柱填料特性 2017-4-9 12 材料与化学化工学院 2017-4-9 13 2.1 柱填料特性 目前HPLC分析中常用的几种填料类型主要包括：全多孔微球、薄壳型微球、灌注色谱填料等。其中由于全多孔微球填料很好的兼顾柱效、样品容量、使用寿命、灵活性等众多理想的性质，因此应用最为普遍。薄壳型微球仅适于分析性HPLC。灌注色谱填料非常适于蛋白质等大分子的制备分离，但用于小分子分析分离较少。 综合考虑柱效、反压和寿命等方面因素，目前约5μm粒径固定相在分析型HPLC中应用最为广泛，1.5 ～ 3μm左右的多孔或无孔微粒在快速分离中显示出较为明显的优势。粒度分布范围越窄，填充色谱柱床的稳定性越好