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超速离心机 超速离心是生物化学和分子生物学不可缺少的技术手段。广泛应用于大分子、细胞、细胞器等的分离、纯化。通过离心分离或离心分析有的可直接获得有关细胞、细胞器、病毒和生物大分子的信息,有的为进一步作化学分析、生物学功能测定以及形态学上观察超微结构提供了基础。 1.离心机分类 1.3.1（美）Beckman-Coulter Optima XL-A，XL-I 分析超速机型 Optima XL 系列，Nmax=10 万rpm，RCFmax800,000×g Optima-MAX(台式) Nmax=1.3×105rpm, RCFmax=1019,000×g Optima-L-XP 系列 Nmax=10 万rpm, RCFmax800,000×g 1.3.2（日）Hitachi Koki CP-100WX，Nmax=10 万rpm, RCFmax800,000×g（有与计算机联用的模拟软件，在转头上自动记录离心数据，转头寿命自动管理） CS-150GX，150GXL，Nmax=15 万rpm （小型机，目前世界上转速最高，离心力最大RCFmax=1050,000×g） 2.离心方法　　　　　　　　　　　　　　 2.2 速率区带离心 2.3 等密度梯度离心 3.转子应用选择 4.1 管子组成材料 PA：Polyallomer 聚异质　　　 PP：Polypropylene 聚丙烯 PE：Polyethylene　聚乙烯 　 PC：Polycarbonate 聚碳酸酯 PET：Polyethyleneterephtalate 对苯二甲 　SS：Stainless steel 不锈钢 Glass: Corex, Pyrex 玻璃 4.2 形状 * 1.1.低速离心机 转速范围:4,000-8,000rpm 离心力范围.:Up to 10,000xg 样品颗粒范围 : 大于 1μm 样品 : Blood, Bacteria, Cells 机型 : 小型机, 台式机,大容量机 Large volume 1.2.高速离心机 转速范围:13,000-22,000rpm 离心力范围:≦ 50,000xg 样品颗粒范围 : more than 0.1μm 样品: Mitochondria, Ethanol (NH4)2SO4 precipitation 机型 : 高速, 微量高速 1.3 超速离心机 转速范围:70,000-150,000rpm 离心力范围:505,000-1,050,000xg 样品颗粒范围 : ≧0.002μm 样品: Plasmid DNA, Chromosome DNA, RNA, Virus, Protein, Membrane, Ribosome, 机型 : 制备型超速,微量超速 2.1差分离心 最常规的离心机方法,主要分离细胞器,线粒体,核糖体 Tissue 组织 Homogenized 均样 Homogenate 组织匀浆 经过纱布等过滤,离心: 700xg, 10min. Pellet (沉淀粗颗粒) Supernatant 上浮液 离心: 7,000xg, 10min. Pellet (线粒体) Supernatant上浮液 Pellet (核糖体) Supernatant (生物大分子类) 离心: 105,000xg, 1hr Sample 样品.1 5% 蔗糖液 20% 蔗糖液 样品１ 样品２ 样品３ 利用蔗糖密度液为介质进行分离(常规蔗糖浓度: 5-20%(w/w)) 连续密度剃度 离心前加样 样品.2 样品.3 离心后,根据样品沉淀系数 而分离获得 主要是利用生物大分子或亚细胞颗粒不同的沉降常数，在离心后分布在不同的预先铺制好的介质密度区，从而达到分离、纯化的目的。离心密度介质主要用蔗糖也可用甘露糖、甘油、多聚糖类、中性硅胶油等。这类离心技术广泛用于亚细胞颗粒，如叶绿体、线粒体、微粒体、细胞膜以及蛋白、酶、RNA等的研究。 样品１(低密度) 样品２(高密度) 等密度液 低密度 高密度 离心前样品 离心后样品,依据密度不同而得到分离(density) 利用CsCl 密度液为介质进行分离 主要是利用离心管某些适当的低分子盐(如氯化艳，硫酸艳等)的水溶液，在离心过程中由离心力和溶质分子扩散力达成平衡后形成溶质分子的密度梯度。如果在溶液中有不同的生物大分子，则这些大分子按其固有的密度(浮标密度)分布在相应的密度区，从而达到分离目的。这类离心目前广泛用于DNA、RNA、核糖体等的分离，可以说是分子遗传研究领域中必不可少的实验手段。 1965年，（英） MSE