东北师范大学生物基础实验教学中心教学课件.pptVIP

实验一 植物组织水势的测定（小液流法） 一、原 理 当植物细胞或组织放在溶液中时，如果植物的水势小于溶液的渗透势（溶质势），则组织吸水而使溶液浓度变大；反之，则植物细胞内水分外流而使溶液浓度变小；若植物组织的水势与溶液的渗透势相等，则二者水分保持动态平衡，外部溶液浓度不变，此溶液的渗透势即等于所测植物的水势。可以利用溶液的浓度不同其比重也不同的原理来测定试验前后溶液浓度的变化。然后根据公式计算其渗透势。 二、仪 器 药 品 试管 毛细吸管（尖端弯成90度） 移液管 单面刀片 镊子 次甲基蓝 三、实 验 步 骤 1．首先配制一定浓度蔗糖溶液（0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8M）各10ml，注入试管中，各管都加上塞子，并编号。按编号顺序排成一列，放在试管架上，作为对照组。 2．另取8支试管，编好号，按顺序放在试管架上，作为试验组。然后由对照组中之各试管中分别取溶液4ml移入相同编号的试验组试管中，再将各试管都加上塞子。 3．用刀片将马铃薯切成7mm×7mm、厚约2mm大小相等的小块，共80块。向试验组的每一试管中各加相等数目的马铃薯小片，塞好塞子，放置30分钟，在这段时间内摇动数次，到时间后，向每一试管中各加次甲基蓝粉末少许，并振荡，使溶液着色均匀。 4．用毛细吸管从试验组的各试管中依次吸取着色的液体少许，然后伸入对照组的相同编号试管的液体的中部，缓慢放出一滴蓝色试验溶液，并观察小液流移动的方向，并记录之。 5．计算 记录小液流不动的试管中蔗糖溶液的浓度，按ψπ=－RTiC计算水势值。 C＝等渗浓度（mol/L） R＝气体常数（0.008314MPa/L/mol/K） T＝绝对温度 i＝解离系数（蔗糖＝1，CaCl2＝2.60） 【思考题】 1．测定同一植物上部及下部叶片的水势有何差别。 2．用小液流法测定植物组织水势与用质壁分离法测定植物细胞渗透势都是以外液的浓度算出的溶质势为根据，他们之间的区别何在。 实验二 氯化三苯基四氮唑(TTC)法测定根系活力 一、原理 氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化还原电位为80mV的氧化还原物质，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯基甲 （TTF），如下式： 生成的TTF比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。 二、材料、设备仪器及试剂 （一）材料： 水培或砂培小麦、玉米等植物根系。 （二）仪器设备： 分光光度计； 分析天平（0.1mg）； 电子顶载天 平（感量0.1g）； 恒温箱1台； 研钵1套； 三角 瓶50ml； 漏斗； 量筒100ml； 移液管10ml 、2ml 1支、0.5ml 各1支； 刻度试管10ml； 试管架；容 量瓶10ml； 药勺； 石英砂适量； 烧杯10ml、 1000ml； 小培养皿 二、材料、设备仪器及试剂 （三）试剂： 1. 乙酸乙酯（分析纯）。 2. 次硫酸钠（Na2S2O4，强还原剂，俗称保险粉），分析纯。 3. 1％TTC溶液：准确称取TTC1.0g，溶于少量水中。定容到100ml。用时稀释至各需要的浓度。 4. 磷酸缓冲液（1／15mol/L，pH7）。 5. 1mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55ml，边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000ml。 6. 0.4mol/L琥珀酸：称取琥珀酸4.72g（含6个结晶水10.81g），溶于水中，定容至100ml即成。 三、实验步骤 1．定性测定 （1）配置反应液 把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸钠和磷酸缓冲液按1︰5︰4比例混合。 （2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基切除，将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。 三、实验步骤 2．定量测定 （1）TTC标准曲线的制作 吸取0.25ml 0.4%TTC溶液放入10ml容量瓶，加少许Na2S2O4粉末，摇匀后立即产生红色的TTF。再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。然后分别取此液0.25ml、0.5ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定光密度，绘制标