流式常用荧光染料研讨.doc

如何选择流式细胞仪测定常用的荧光染料 流式细胞仪测定常用的荧光染料有很多种,我们如何来选择流式细胞仪测定的常用荧光染料呢？ ??? 首先要考虑，他们分子结构不同,激发光谱和发射光谱也不同,选择荧光染料时，必须依据流式细胞仪所配备的激光光源的发射光波长做为重点考虑。 发射光波长，如：氩离子气体激光管,它的发射光波488nm； ??????????????? 氦氖离子气体激光管发射光波长633nm； ????????????????488m激光光源常用的荧光染料有FITC（异硫氰酸荧光素）； ??????????????? PE（藻红蛋白） ??????????????? PI（碘化丙啶） ????????????????CY5（化青素） ??????????????? preCP(叶绿素蛋白) ??????????????? ECD(藻红蛋白-得克萨斯红)等。 ?激发光和发射光波长，如下： ? 激发光波长（m） 发射光峰值（m） FITC 488 525（绿） PE 488 575（橙红） PI 488 630（橙红） ECD 488 610（红） CY5 488 675（深红） PreCP 488 675（深红） 流式细胞仪中常用的荧光染料光学特征以及需要的激光器 Ex波长(nm) Em波长(nm) ???备????注 激光器 Hoechst 33342 355 ? 465 ? DNA染色核酸标记 351nm紫外激光器 Hoechst 33258 365 ? 465 ? DAPI 372 ? 456 ? Indo-1 350 ? 405 ? 细胞内钙离子标记 FITC 490 ? 520 ? 标记抗体 488nm?氩?离?子?激?光?器 R_PE 480 ? 578 ? PE_CY5 480 ? 670 ? PE_CY5.5 480 ? 695 ? PerCP 490 ? 675 ? Alexa Fluor 488 494 ? 517 ? PE_Texas Red 480 ? 613 ? Rhodamine 123 500 ? 540 ? 线粒体标记 Fluo-3 506 ? 526 ? 细胞内钙离子标记 DiOC6(3) 480 ? 501 ? 内质网标记 YOYO-1 490 ? 510 ? DNA染色核酸标记 Propidium Iodide 530 ? 615 ? Acridine Orange 490 ? 640 ? APC 650 ? 660 ? 标记抗体 633nm氦氖激光器 Alexa Fluor 647 650 ? 668 ? CY5 650 ? 667 ? 流式?细胞仪交流论坛：/forum-181-1.html 荧光染料谱染料名称 Excitation(nm) Emission(nm) 分子量 备注信息 Reactive and conjugated probes Hydroxycoumarin 325 386 331 Succinimidyl ester Aminocoumarin 350 445 330 Succinimidyl ester Methoxycoumarin 360 410 317 Succinimidyl ester Cascade Blue (375);401 423 596 Hydrazide Pacific Blue 403 455 406 Maleimide Pacific Orange 403 551 ? ? Lucifer yellow 425 528 ? ? NBD 466 539 294 NBD-X R-Phycoerythrin (PE) 480;565 578 240 k ? PE-Cy5 conjugates 480;565;650 670 ? aka Cychrome, R670, Tri-Color, Quantum Red PE-Cy7 conjugates 480;565;743 767 ? ? Red 613 480;565 613 ? PE-Texas Red PerCP 490 675 ? Peridinin chlorphyll protein TruRed 490,675 695 ? PerCP-Cy5.5 conjugate FluorX 494 520 587 GE Healthcare Fluorescein 495 519 389 FITC; pH sensitive BODIPY-FL 503 512 ? ?