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无菌检查法 浙江省食品药品检验所 王知坚 无菌检查的定义 无菌检查的环境 无菌检查的设备 无菌检查的人员 无菌检查的外部供应 无菌检查的样品管理 无菌检查的具体步骤 无菌检查的结果保证 无菌检查的定义 中国药典2005年版对无菌检查的定义是：无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。 由于无菌是一个相对的概念，因此，对无菌检查的结果应该有一个正确的认识－即产品通过无菌检查仅仅意味着在该检验条件下，供试品未发现有微生物污染，并不表示所有的产品都是无菌的。 反之，当供试品中检出微生物污染，则可以认为批产品的微生物污染风险相当高。 无菌检查的环境 中国药典2005年版对无菌检查环境的规定主要有： 无菌检查应该在洁净度为10000级，局部100级的单向流空气区域内或隔离系统内进行 无菌检查的全过程，应该遵守无菌操作，避免微生物污染，检查的环境应该能够提供这种保障 无菌检查的单向流空气区域、工作台面和环境应该定期验证 隔离系统应该按相关技术要求进行验证，内部洁净度应该符合无菌检查的要求 洁净室 一般应该具备核心操作区、缓冲区、更衣区、阳性对照操作区等区域 实验室应该根据洁净室的特点，制订并执行洁净室的使用、维护、验证标准操作规程 为避免交叉污染，无菌检查的洁净室宜单独设置，单独使用 洁净室的使用 在实验开始之前1小时启动风机系统（空调系统），并开启空气消毒装置，消毒至少半小时后关闭 观察并确保洁净室的压差 物品经物流通道进入洁净室 人员正确着装后经人流通道进入洁净室 使用完毕，应用消毒液清洁工作台面。实验人员在更衣室换下无菌工作衣后出洁净工作室。开启空气消毒装置，消毒至少半小时后，关闭洁净工作室的控制开关。 洁净室的维护 系统维护 过滤器的清洗更换：每月清洗净化空调系统的新风口和初效空气过滤器；每季度更换净化空调系统的中效过滤器；每年更换单向流区域的高效空气过滤器，并视洁净室验证结果，选择更换其他区域内的高效空气过滤器。 风机系统的维护：每半年检查送风风机和排风风机的各项指标，视情况更换风机涡轮轴承。 空调系统的维护：每年夏、冬两季之初，对空调机组进行维护，重点是压缩机保养、制冷剂补充和远程控制系统验证。 洁净室内压力梯度的维护：每半年调试洁净室内各区域间的压力梯度，确保正压房间对相邻房间有5Pa以上的正压，负压房间对相邻房间有5Pa以上的负压。 清洁维护 洁净室的清洁维护分为日常维护、定期维护和不符合时的维护。 日常维护由每次实验的实验人员进行，维护的范围为进行实验的洁净工作室和辅助洁净区，维护的频率为每次实验后。 定期维护由实验室指定专人进行，维护的范围为所有洁净工作室，维护的频率为每二周一次。 不符合时的维护由实验人员进行，维护的范围为所有不符合的洁净室，维护的时机为出现不符合时。 洁净室的验证 验证的项目：洁净度、微生物数、换气次数、静压差、照度、温度、相对湿度 验证的技术要求 验证的周期 建议每半年一次，也可根据洁净室的使用频率适当增加验证次数 验证的方法 洁净度和微生物数：采用GB/T16292~16294-1996 其他项目：参照JGJ71－90 验证不符合项的处理 当洁净度、微生物数、换气次数、静压差等指标出现不符合时，应停用洁净室，对净化系统进行调整后，在重新验证，直至符合规定才能重新启用洁净室 当温度、相对湿度和照度等指标出现不符合时，洁净室可不必停用，但应及时修复空调系统（或更换照明装置），使其符合规定 隔离系统 可以不必使用洁净室，在普通实验室内，放置隔离系统就可以进行无菌检查实验 隔离系统一般分为实验区域、传递区域等 隔离系统通常采用臭氧或气态过氧化氢等消毒剂进行空间消毒 隔离系统通常具有高效空气过滤器，使操作区域符合局部100的要求 隔离系统通常对外界呈正压 对隔离系统，验证的重点是消毒效果的持续保持能力 无菌检查的设备 用于无菌检查的主要仪器设备有：超净工作台、集菌仪、生物安全柜、高压蒸汽灭菌器、电热恒温干燥箱、隔水式恒温培养箱、生化培养箱、立式冷藏柜和生物显微镜等。 上述仪器设备中，温度设备应进行校准或验证，超净工作台和生物安全柜应进行性能确认。校准、验证和确认的频次通常为每年。 温度设备的校准：对培养箱、干热灭菌器等温度设备，应进行热分布和热均匀性等指标的检定；对湿热灭菌设备应检定安全阀、压力表等安全装置，同时应采用生物指示剂进行有效性确认。 超净工作台和生物安全柜的性能确认：应进行洁净度和微生物数的测定，生物安全柜还应该进行气流流型和压差测定。 无菌检查的人员 应由具备微生物学专业背景，并经过无菌操作培训的专业人员来从事无菌检查 从事无菌检查的专业人员除了应该具备专业技能外，还应该具有高度的责任心和严谨细致的工作作风 上岗培训应至少包