蓖麻毒素分离与提纯.docxVIP

蓖麻毒素的分离与提纯近年来,从蓖麻中提取分离蓖麻毒素又是一个新的研究热点。首先,是因为蓖麻毒素有很好的药用价值,如用于医药、农药,特别是用于抗肿瘤的靶向药物。其次,在检测中制备标准样品是必备的。前人在研究蓖麻毒素的分离与提纯方法时，提出了不同的分离与提纯方法。温燕梅等在“蓖麻不同部位杀虫活性成分蓖麻碱的提取及含量”一文中提出了用微波辅助提取蓖麻不同部位的蓖麻碱。蓖麻的提取: 蓖麻不同部位在鼓风干燥箱50 ℃下烘至恒重，粉碎，用乙醚回流提取2 h，去除其中的油脂和色素，自然晾干备用。 按照参考文献[5]方法，称取30 g，以料液质量比1∶20加入水，在微波炉以中高火作用15 min，趁热过滤，将滤渣重复上述步骤再提取1次。 将两次的粗提取液合并，搅拌均匀，用旋转蒸发仪浓缩，然后用鼓风干燥箱于70 ℃下烘干成膏状，用索氏提取器加入乙醇回流提取2 h并浓缩至30 mL左右，让其缓慢冷却析出结晶。郑成在“蓖麻碱的提取、纯化、改性及其杀虫活性研究”一文中也是用微波辅助的方法进行提取蓖麻碱。赵丹在“蓖麻毒蛋白的提纯及杀虫效果研究”一文中提出用Nicolson等的方法提纯毒蛋白。称取40.0g脱壳蓖麻籽，120ml0.lmol/L pH7.2磷酸缓冲液匀浆，4℃冰箱中抽提24小时，4000rm/min离心20min，小心去除表面脂肪层取上清液，上清液中加入固体(NH4)2SO4至30%饱和度，4oC冰箱过夜。4O00rm/min离心20min，取上清。上清液中加入固体(NH4)2SO4饱和度50%，4oC冰箱保存8h，4000rm/min离心20min，弃上清液。将沉淀用适量001mol/L pH.72磷酸缓冲液溶解，在001mol/L pH.72磷酸缓冲液中透析去盐。用PEG10000覆盖透析袋至于4℃冰箱中过夜，浓缩得粗提取液。选用2*25cm层析柱，将Sepharose 4B缓慢装入层析柱中，避免产生气泡和断层，以0.01mol/LpH7.2磷酸缓冲液平衡12h，用核酸蛋白检测仪检测28Onm波长的吸收峰。将浓缩的粗毒液缓慢加入层析柱中，动作轻柔避免破坏胶面。使蓖麻毒素充分吸附在柱上。用0.01mol/LpH7.2磷酸缓冲液洗脱，核酸蛋白检测仪检测280nm波长下吸收峰，直至吸光值下降至0.1以下。用0.01mol/LpH7.2磷酸缓冲液透析收集液除去半乳糖，EPG10000适当浓缩后，备用。用0.01mol/LpH7.2磷酸缓冲液平衡并洗脱，蛋白检测仪检测28Omn吸光值，收集吸收峰。高宝岩在“蓖麻毒蛋白的提取及分析”一文中也是此方法提纯收集毒蛋白的。而他在“蓖麻碱的提取及光谱研究”一文中是用，取上面所得蓖麻饼粕干粉20g, 装入索氏提取器回流料斗, 烧瓶中加入200mL 乙醇, 水浴加热提取8-10h, 提取液采用减压低温蒸馏可回收大部分乙醇, 剩下少许样品溶液进行真空干燥4h, 干燥后所剩物质溶于20mL 热水中, 冷却后用4℃乙醚进一步萃取以除去少量残余的油脂, 连续萃取3- 4 次, 所得水溶液采用低温真空干燥箱干燥, 所得产物为①。用乙腈反复洗涤①, 洗涤液合并, 真空干燥得蓖麻碱②, 进一步精制可将②溶于乙醇, 在乙醇中重结晶。赵青余等在“蓖麻碱的分离鉴定及其含量测定方法的研究”一文中用蓖麻饼500 g, 加水2 000 mL, 加热煮沸并保持微沸, 提取3 次, 每次2 h, 合并水提液, 减压浓缩至粘稠膏状, 加入氯仿回流提取3 次, 合并氯仿提取液, 减压浓缩至干, 用乙醚冲洗多次除去油脂后, 用无水乙醇重结晶, 得无色棱柱状结晶I。此结晶就是蓖麻碱。张海悦在“蓖麻碱的提取纯化及结构分析”一文用的方法与上述相同，就是溶剂的顺序和选择及温度有一点点区别。王春龙在“蓖麻碱的化学提取及其在黑大豆上的应用”一文中用氯仿、乙醇、甲醇三种不同化学溶剂分别从蓖麻籽壳和干燥的子叶中提取蓖麻碱。从蓖麻籽壳中提取蓖麻碱的化学提取方法 用氯仿作为溶剂进行提取 将经过通风干燥过的蓖麻籽壳分别称取30克、40克、50克，用食品粉碎机粉碎，粉碎效果达到能够通过100目双层筛布程度。加入乙醚和石油醚混合液(1:2)，固液比(l:4)，放入超声波仪中超声20分钟，并不断用玻璃棒搅拌，取出后静止停放，待上层混合液澄清时将其倾出。反复上述操作3次后，通过低温干燥器进行干燥，得到松散的蓖麻籽壳。配置浓度为3%0稀盐酸水溶液，将称取的蓖麻籽壳按固液比1:20分别置于所配置的稀酸溶液中进行煎煮，煎煮时间为2h、4h、6h，煎煮次数为3次。经过2h煎煮后，将上述的稀酸溶液分别收集，用中速滤纸进行过滤，然后将滤液置于分液漏斗中，倒入石油醚进一步去除油脂、蹂质等物质，滤液与石油醚混合比例为1:2，反复操作3次，去除杂质后将滤液回收，用浓氨水将溶液调为中性后，将滤