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浸润性乳腺癌中mtDNAHV2区突变及意义.doc
浸润性乳腺癌中mtDNAHV2区突变及意义
摘要:目的 检测乳腺癌患者mtDNA D-loop环HV2区体细胞性突变并探讨它在肿瘤发生中的作用。方法 采用聚合酶链反应-单链构像多态性(PCR-SSCP)的方法对20例浸润性乳腺导管癌组织和癌旁正常组织的mtDNA非编码区D-loop环HV2区进行分析,将出现异常条带所有标本进行基因测序。结果 经PCR-SSCP检测,在20例乳腺癌mtDNA中共发现7例出现异常条带;测序结果显示,7例?y序标本中,HV2区共检测到31个新的突变位点,其中有3个属于微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI),7例移码突变,其余为点突变(point mutation),7个位点位于复制和转录的区域。结论 浸润性乳腺导管癌mtDNA HV2区是一个高度多态性和突变性的区域,它与乳腺癌的发生、发展有重要关系。
关键词:浸润性乳腺癌;mtDNA;HV2区;聚合酶链反应-单链构像多态性
Abstract:Objective To detect the effect of mutations of HV2 region of D-loop in mtDNA of the breast cancer.Methods It analysed the HV2 region of D-loop in mtDNA in the 20 cases invasive ductual breast carcinoma and 20 cases paracarcinoma tissues by PCR and PCR-single stranded conformation polymorism.Results The 7 cases exceptional bands were found from 20 breast carcinoma in all of the samples by PCR-SSCP;and the sequencing results indicated that 31 new HV2 mutations were found in 7 sequencing specimens,the 3 of them were mitochondrial microsatellite instability(MSI);the 7 of them were frameshift mutations;others were point mutation;and the 7 of them located in the region of mtDNA replication and transcription.Conclusion The mtDNA HV2 region is a highly polymorphic and mutatble region,that could be some relations in the breast carcinoma development.
Key words:Invasive ductual breast carcinoma;mtDNA;HV2;PCR-single stranded conformation polymorism
线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)存在于细胞质的线粒体中,是细胞内唯一的核外遗传物质,由16569bp组成的双链闭合环状分子,含有自我复制、转录和翻译的遗传体系。mtDNA含有37个编码基因,包括编码氧化磷酸化系统13个蛋白质的亚单位、2个rRNA及22个tRNA的结构基因。由于不受组蛋白保护,修复功能不完善,很容易成为致癌物质攻击的标靶。因此mtDNA的突变与细胞癌变之间的关系已经越来越受到重视,成为研究的热点。本文利用PCR-SSCP和基因测序法对mtDNA D-loop环HV2区的基因突变情况进行了研究,并探讨了突变在乳腺癌进程中的作用。
1 资料与方法
1.1一般资料 取自2004年5月~2005年7月延边大学附属医院肿瘤外科手术的患者,20例乳腺癌组织及相对应的癌旁正常组织,手术后切除部分组织立即投入液氮中,后放入-80℃冰箱中保存备用。20例乳腺癌患者年龄为36~73岁,平均(51.15±9.54)岁,所选标本均经病理确诊为浸润性导管癌。
1.2方法
1.2.1组织DNA提取 应用小量组织DNA提取纯化试剂盒进行组织DNA的提取,并用1%琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白定量分析仪进行DNA提取及纯度检测。选用GeneAmp 2400型PCR扩增仪进行PCR扩增。引物序列为HV2:5-CTC ACG GGA GCT
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