新型Bcl2反义寡核苷酸F951对人白血病裸鼠移植瘤的治疗作用.pdf

650 以科学发展观促进科技创新(上) 新型Bcl一2反义寡核苷酸F951对人白血病 裸鼠移植瘤的治疗作用 李东良 上海市和田路64号，第二军医大学长征医院感染科，200070 摘要 目的：研究新型反义寡核苷酸F951对急性髓性白血病(AML)的体内治疗作用。 方法：体外大量扩增高表达Bcl一2基因的HL60细胞，建立AML裸鼠移植瘤模型，采取瘤体 局部注射给药。观察F951及F951联合小剂量Ara—c对肿瘤生长和荷瘤裸鼠生存期的影响。 应用荧光定量RT—PCR检测瘤细胞Bcl一2mRNA的表达；光镜观察瘤组织形态结构的变 化：结果：F951有明显抑制人AML裸鼠移植瘤生长的作用，延长荷瘤鼠生存期，F951联合 Ara—C治疗效果更佳，呈现协同趋势。结论：F951在体内能特异性地抑制AML椿鼠移植瘤 Bcl一2基因表达．下调Bcl一2mRNA水平，激活凋亡调控机制，诱导瘤细胞凋亡，增加化疗药 物的敏感性，发挥抗肿瘤作用。 关键词 白血痛Bc卜2基因反义寡核苷酸 药效学 反义寡核苷酸(antisense 段。F951是我们自行设计合成和筛选的针对癌基因Bel一2mRNA的一种新型反义硫代磷酸寡脱氧核 苷酸(antiseneephosphorothloate 白血病(Acute Myeloid 裸鼠移植瘤的体内治疗作用，为F951治疗血液肿瘤提供可靠的理论依据。 一、材料与方法 (一)药物 同，序列混杂的一段单链DNA，在基因库(Gene bank)中检索，没有发现与其完全互补的mRNA序列，作 为反义序列特异性对照。二者均在Oligopilotll DNA／RNA大规模台成仪上采用亚磷酸胺法合成，经过 纯化、脱盐、定量后分装、冻干，置一20*(2保存，纯度≥98％(福建省血液病研究所基因工程室合成)。阿 糖胞苷(Ara—c)北京双鹤药业生产。 (二)人急性髓性白血病裸鼠移植瘤模型的建立 1．HL60细胞的培养 高致瘤性HL60细胞是将在裸鼠体内移植成功的HL60细胞，体外传代30代后再移植给裸鼠，达 到皮下接种致瘤率为100％的细胞，且生物学特性检查与HL60细胞无明显的差异，仍高表达Bcl一2蛋 白，保存备用。复苏后用含10％胎牛血清(GIBcO—BRL)I拘RPMI 1640培养液培养，细胞初始浓度为 以科学发展观促进科技创新(三) 651 x106／mI．备用。 1640培养液重恳细胞，调整浓度至5 PBS清洗2次后用无血清的RPMI 2．动物饲养、移植瘤建立 房，恒温(25-275C)，恒湿(45％～50％)SPF的空气层流柜中饲养，自由摄取食物和水，饮用水、饲料、垫 料以及其他裸鼠接触物品均经高压灭菌处理。雌雄各半，5～6周龄太，平均体重为209。于每只裸鼠右 2mL(每只1x106]inL个细胞)．约 后肢背侧皮下，接种浓度为5×106]mL的高致瘤HL60细胞悬液O 5d后即可触及移植肿瘤生长，第7d所有裸鼠接种部位均肉眼可见肿块隆起。瘤体测量，拍照备用。 (三)动物分组药物处理 1．药效学研究 挑选肿块大小相近的荷瘤操鼠25只．随机分为5组，每组5只，雌雄兼用。F951治疗组每日瘤内注射 (it)F9515ms／kg；生理盐水对照组瘤内注射等体积(0．3mL)生理盐水；无义对照组按相应给药途径给同等 剂量的FNS；F951与Ara—C联合治疗组每13瘤内注射F9515rrdkg，腹腔注射(ip)Ara—c2megkg；Ara—C 对照治疗组每日腹腔注射Axa—C2mgfkg；每周测量瘤体积，治疗14d拉颈处死小鼠，剥离完整