IAE13高效液相色谱法测定食品中的防腐剂和甜味剂-雷杰.ppt.ppt

高效液相色谱法测定食品中的防腐剂和甜味剂 High performance liquid chromatography 内容提要 高效液相色谱法(HPLC)的特点 高效液相色谱法的主要类型和原理 高效液相色谱仪 色谱柱简介 色谱理论基础 实验内容 （二）化学键合相色谱法 以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合相色谱法。 化学键合相：采用化学反应的方法将官能团键合在载体表面所形成的固定相。 （三）反相键合相色谱法 固定相：非极性键合相 如十八烷基硅烷（C18，ODS）、辛烷基（C8）键合硅胶 流动相：水为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极性调整剂 常用甲醇-水、乙腈-水体系等 保留行为的主要影响因素 1、溶质的分子结构（极性） 极性越弱，疏水性越强，k越大，tR也越大。 同系物碳数越多，极性越弱，k越大； 引入极性取代基，降低疏水性，k值变小。 2、固定相 键合烷基的疏水性随碳链的延长而增加，溶质的k也增大。 硅胶表面键合烷基的浓度越大，则溶质的k越大。 3、流动相 极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的k越大 溶剂种类：水为弱溶剂，醇为强溶剂 溶剂比例：水的比例增加，使k增大 中性盐的加入：使中性溶质的k增大 pH：影响弱酸、弱减的离解 流动相的pH降低，弱酸k增大，tR增大；弱碱相反。 Agilent HPLC1100五个主要部分: 高压输液/溶剂传输系统 样品进样/引入系统 样品分离系统 信号检测系统 数据处理系统 仪器配置:在线脱气机、四元泵、多波长紫外检测 器、柱温箱、手动进样器、20 mL HPLC进样环。 Agilent HPLC1100堆积配置图 色谱柱填料简介 防腐剂，苯甲酸和山梨酸及其盐类都是常用食品防腐剂，糖精钠是食品中常用的人工甜味剂。 我国食品卫生标准规定苯甲酸和山梨酸在饮料中最大使用量均为0.2 g/kg。糖精钠最大使用量为0.15 g/ kg。 我国对以上三种食品添加剂测定的标准方法有：薄层色谱法、气相色谱法及高效液相色谱法， 而高效液相色谱法可以对各种添加剂同时测定，具有高效、高速、高灵敏度及高自动化等特点。 本实验采用高效液相色谱配合多波长紫外检测器，反相色谱法同时测定上述三种食品添加剂，利用保留值定性，外标法定量。 成人与继续教育学院 成人与继续教育学院 职 职 业 业 教 教 育 育 学 学 院 院 Experimental Center for Chemical education, FDU Experimental Center for Chemical education, FDU 化学教学实验中心 而 笃 志 学 问 而 近 思 博 切 而 笃 志 学 问 而 近 思 博 切 复旦大学 化学教学实验中心雷 杰 历史回顾 M.S. Tswett. Ber. Dtsch. Bot. Ges. 24: 384-393 (1906) 1906 - Mikhail Semenovich Tswett (1872-1919) 碳酸钙吸附剂 石油醚 1940‘s - 分配色谱和纸色谱 1950‘s - 气相, 薄层，凝胶过滤色谱 梯度洗脱色谱 1960‘s - 商业高效液相色谱. 一、高效液相色谱法(HPLC)的特点 固定相、流动相；气相、液相。 高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论；在技术上，流动相改为高压输送；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。高压液相色谱的特点有： 1. 高压：液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对流动相施加高压。 2. 高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于 1h 。 3. 高效：颗粒极细（一般为10 mm以下）、规则均匀的固定相，传质阻抗小，柱效高，分离效率高。 4. 高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。 5. 适应范围宽：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于 400 以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数