水貂阿留申病毒VP2基因的克隆及原核表达课程.doc

本科生毕业论文（设计） 题 目: 水貂阿留申病毒VP2基因的克隆及原核表达 姓 名: 韩蓉 学 院: 动物医学院 专 业: 动物医学 班 级: 动医54班 学 号: 1715428 指导教师: 雷治海 职称: 教授 姜焱 职称: 高级兽医师 2010 年 5 月 18 日 南京农业大学教务处制  目 录 摘要…………………………………………………………………………………………1 关键词…………………………………………………………………………………………1 Abstract………………………………………………………………………………………1 Key words……………………………………………………………………………………1 引言（或绪论）………………………………………………………………………………1 1　材料与方法………………………………………………………………………………1 1.1　材料 ……………………………………………………………………………………1 1.2　方法 ……………………………………………………………………………………2 1.2.1　ADV的VP2基因的PCR扩增…………………………………………………………2 1.2.2　VP2基因与T载体的连接……………………………………………………………2 1.2.3　pET-VP2重组表达载体的构建………………………………………………………3 1.2.4　BL21 VP2 诱导表达比较……………………………………………………………4 2　结果与分析………………………………………………………………………………5 2.1　vp2基因的PCR结果……………………………………………………………………5 2.2　PT-VP2重组质粒的酶切鉴定…………………………………………………………5 2.3　pET-VP2重组质粒的构建………………………………………………………………6 2.4　BL21VP2 E.coli重组蛋白表达…………………………………………………………6 3　讨论………………………………………………………………………………………6 3.1　本实验的研究意义……………………………………………………………………6 3.2　本实验的优化条件……………………………………………………………………7 3.2.1　PCR条件的优化………………………………………………………………………7 3.2.2　目的基因片段与表达载体pET-32a(+)连接的优化………………………………7 3.2.3　诱导表达条件的优化………………………………………………………………7 致谢…………………………………………………………………………………………7 参考文献……………………………………………………………………………………7 水貂阿留申病毒VP2基因的克隆及原核表达 动物医学专业学生 韩蓉 指导教师 雷治海 摘要：水貂阿留申病(AD)又称浆细胞增多症，是由水貂阿留申病细小病毒（ADV）持续感染引起的一种水貂自身免疫系统紊乱，同时并发自身免疫慢性病毒血症。根据Genebank上的水貂阿留申病病毒的VP2基因序列，设计了一对引物，通过PCR方法扩增了完整的VP2基因，将PCR产物插入pET-32a(+)载体中，构建成重组原核表达载体pET-VP2。阳性重组质粒转化宿主菌BL21（DE3）中感受态细胞，用IPTG进行诱导表达，对表达产物进行SDS检测，结果表明表达产物的分子质量约为21kD。成功表达了VP2蛋白，为VP2蛋白的作用研究以及相关疫苗的制备奠定了基础。 Cloning and Prokaryotic Expression Of Main Antigenic Region Of VP2 Gene of Aleutian Mink Disease Parvovirus student majoring in veterinary medicine Han Rong tutor Lei Zhih