药物色谱分析-丁黎部分讲义.doc

影响色谱柱展开的柱内柱外因素 液质连用 LS-MS 离子源 接口：流动相及样品的雾化，除去溶剂分子；完成对样品的电离 大气压离子化API：使样品的离子化在处于大气压条件下的离子化室中完成。 电喷雾离子化ESI 浓度型检测器 强电场影响下，对高度带电雾滴进行精细雾化的过程 A．雾滴形成过程：锥形-喷口模型 电场下正负离子的移动和表面张力制衡---形成Taylor锥----电压上升，带电雾滴释放 B．雾滴变小过程：雾滴—溶剂蒸发—小雾滴---达到Rayleigh稳定限---库仑爆炸 雾滴蒸发过程与雾滴起始尺寸和电荷相关。 决定雾滴半径的重要参数是流速和溶液导电率。低流速和高导电率产生细雾滴。 C．气相离子形成过程 1、分析物在溶液中的离子化对电喷雾技术很重要，碱性化合物的LC-ESI-MS分析，可选用酸性的流动相；相反碱性的流动相适用于一些酸性的化合物。使样品成离子状态。 2、表面张力过大，难以形成锥形；而电压过大，容易放电形成簇离子。因此选用表面张力小的溶剂，如甲醇，乙腈。三低：表面张力低，黏度低，流速低 3、去溶剂的程度：提高干燥器的温度，流速 4、“竞争机制”：一般而言,样品信号强度随着其它电解质浓度的增高而降低. 表面竞争，电荷竞争 大气压化学离子化APCI 软电离方式 与ESI比较，增加电晕放电针：发射自由电子启动后续离子化过程 增加APCI蒸发器：对喷雾气体进行加热 APCI是软的电离方式，由于溶剂蒸汽的保护，样品分子较少受热裂解的影响，大量的热量用于溶剂的蒸发，电离过程属于离子-分子反应。 大气压光离子化APPI 要求待测物的第一电离能小于10eV，而大部分气体和溶剂的电离能大于10eV，因而背景干扰低 高PA的待测物通常是通过与质子化的溶剂发生质子转移反应来达到离子化，低PA的待测物是通过与添加剂发生电荷交换反应来离子化。 添加剂：甲苯，丙酮，苯甲醚 ESI 电喷雾离子化 样品溶液通过具有高静电梯度（约3kV/cm）的喷雾毛细管时，发生静电喷雾，并在干燥气中形成带电雾滴，随着溶剂的蒸发，生成气态离子，气态离子沿着电压和压力梯度进入锥孔到达质量分析器进行分析。 通过喷口与毛细管间的高电压离子化 产生多电荷离子 基于质子亲和力大小 适于中、强极性化合物 蛋白质、肽类、低聚核苷酸等生物分子；胺类、季铵盐等；含杂原子化合物如氨基甲酸酯等 不适合非极性化合物，如烷烃、苯等 离子抑制作用较强，因此对流动相组成有要求，避免表面活性高的试剂。 PH影响大 基质效应大 低流速范围响应更好。 ≤1 ml/mim 线性范围较APCI窄。 软电离方式 APCI 大气压化学离子化 在大气压条件下采用电晕放电的方式使流动相离子化，然后流动相作为化学离子反应气（气相试剂）使样品离子化的技术。样品分子的离子化通过质子化或电荷转移来完成。 电晕放电启动化学离子化 单电荷离子。 基于质子亲和力大小 适于非极性、中等极性小分子。 不适于热不稳定(可能发生热裂解)、难于气化的极性和大分子化合物 离子化过程对流动相组成依赖小，离子抑制较小。 水的比例不限。 PH有一定影响 基质效应小 高流速范围响应更好。 ≤2 ml/mim 正相色谱易于连接 软电离方式 增加电晕放电针：发射自由电子启动后续离子化过程。 增加APCI蒸发器：对喷雾气体进行加热 APPI 大气压光离子化 待测物在气相中吸收由真空-紫外灯（UV lamp）发出的光（10 eV）后放出电子而离子化。 吸收光子而离子化 基于第一电离能大小 分析弱极性和极端非极性化合物 离子抑制小 基质效应极小 低流速相应好 增加真空紫外灯（氪气为多） 质量分析器 按照核质比的不同分离 四级杆质量分析器 扫描方式： 全扫描SCAN：在给定的时间内不间断地对设定荷质比（m/z）范围内所有离子进行扫描。 用于测定未知化合物的或未知混合物中各组分的分子量和质谱图。 用于未知化合物的定性分析 进行SIM前，用SCAN确定扫描的目标离子及其最佳电离参数 选择离子检测SIM：在给定的时间内选择性地扫描某一个或几个选定荷质比的离子，得到的不是化合物全谱。 主要用于定量分析，快速筛选目标化合物。 三级四级杆质量分析器 扫描方式 MS1（前体离子） 碰撞室 MS2（产物离子） 作用 产物离子扫描 固定 惰性气体 扫描 化合物结构推断 某核质比的前体离子的产物离子谱图 前体离子扫描 全扫描 惰性气体 固定 药物降解产物，代谢物结构鉴定，同系物分析 产生某核质比产物离子的前体离子谱图 质荷比轴数据来自MS1，离