Bio-Rad色谱柱说明书.doc

胺基树脂柱使用维护指南手册 目 录 1树脂色谱柱的介绍 2柱子结构 2.1拆箱 2.2 清洗液的制备 3 柱子的保护 3.1安装指南 3.2 清洗指南 4 固定相 5 操作参数 5.1 流速 5.2 样品分离 5.3 压力控制 5.4 测试 6 再生步骤 6.1树脂床蓬松 6.2清洗污染的柱子 6.3 柱子恢复到原始离子状态 6.4 6.5仪器调整/ 连接管道问题 7 加热柱关闭 8柱子保存 8.1 长期保存 8.2 短期保存 9 故障检修 3.1安装保护柱 安装保护柱管，拧松支架末端的螺母。使用Parker式 小室开始使用时可以在任何一个方向使用，改变用过的小室的方向可能导致微粒从小室中流出污染分析柱。小室支架到HPLC柱之间连接一断管前移量（参见小室支架介绍）。将保护柱安装到固定支架上，使用两末端螺母紧固确保固定支架的指状梁紧固。额外的紧固是不需要的，这还有可能破坏焊封或支架。不要使用其他仪器紧固焊封。 3.2 吹洗保护柱 使用10～15ml流动相以0.2～0.3ml/min的流速通过保护柱，对于树脂基色谱柱，在开始的一小段时间内，柱末端流出黄色的液体是正常的。这是储存柱子时形成的磺酸盐聚合物。安装新柱子时需重复此操作。此时，分析柱可以安装到预柱上。 第四部分:连接色谱柱 将流速降低到0.2ml/min。移走分析柱末端的螺母，将保护柱出口末端与分析柱入口管相连。连接分析柱与泵，调节泵低速转动以排除柱子入口处的空气。色谱柱中流过大约20ml脱气流动相后停止。当一个新柱子连接到色谱系统使用或测试时，通过流动相时，柱子仅需连接进口末端。这样可以阻止填料粒子或气泡进入到检测池。当柱子出口末端流出清洁、无气泡的液体时，柱子出口就可以与检测池相连了。 色谱柱和监测池之间的连接管尽可能短这一点是很重要的。注射器和色谱柱、色谱柱和检测池之间的连接管内径（直径）应为0.01英寸。 确保正确的提供、收集以及处理废弃的溶剂。检查保护柱和分析柱连接处无泄漏后，将填充物正确的安装后，将色谱柱放到Bio-Rad柱预热器（目录号：125-0425）。打开色谱加热器开关调节到合适的温度。无流动相流动时不要开色谱加热。只要达到设定的温度后就可以提高流速了。用洗脱液平衡柱子，用开始的洗脱液倾斜柱子。 注意柱中不能进入空气。如果确定柱中已经混入空气，降低柱温，反方向旋转柱子，使得溶剂缓慢流过柱子直到空气完全除去。确定系统所有管路的空气被排净后重新正确的连接柱子。 需注意的一点是所有金属管连接均用压紧螺钉（反相螺母）。金属垫圈被永久的逆着管子压紧。确保系统的死体积最小，拧紧装配管、垫圈和nut finger tight。向里推动管子直到末端固定。用1/4’’ 扳手拧紧1/4转。零件只有密封时需要拧的足够紧；若拧的过紧则会减少零件的使用寿命。 第五部分：操作参数 此时，高效液相色谱系统应该在先后用合适的流动相、启动溶剂进行清洗。保护柱以及分析柱均等量处理。流速应该为0.2ml/min。 5.1 流速 缓慢、倾斜的流过氨基柱。只有当柱温上升到操作温度后才可以提高流速。当使用碳水化合物铵基柱时（HPX-87C，HPX-87P，HPX-87N），在接近环境温度时流速不可高于0.3ml/min。首先，在维持较低流速的时候加热柱子，然后，在柱温达到指定的操作温度后，提高流动相的流速。注意不要超过柱子限定的最高流速。但是即使这样，为延长柱子的使用时间，不可以在最大流速下操作。在公开发表的方法中有最佳流速的选择方法，流速也可以依据分离要求而定。很多时候，降低流速可以提高分离度。典型的，使用300mm长的（30cm）氨基柱，当柱后压低于最高水平时，最佳的操作流速为0.5～0.7ml/min。随着使用时间的延长，因此使用柱后压做为确定流速的主要确定因素。对于HPX-87C，HPX-87H和其他HPX-87系列柱来说，标准的流速为0.6ml/min。 5.2 样品制备 由于样品中某些组分可能在某些溶剂中可能不溶，为防止这类问题的出现，经常将样品溶解于流动相中，样品溶液需经过0.45μm的过滤器过滤。 5.3 柱压检查 HPLC泵压范围应该进行调整，因为压力提高（压力高于标准值10～20％）将引起泵的自动关闭。这样可以在偶然压力升高情况下保护系统。某些HPLC泵的传感器在需要的低压下不能调整，在这种情况下，需要额外的维护以确保没有超过压力限制范围。 压力在正常流速下会缓慢升高（1-2分钟）。这种方法在柱上gentle，提供最大寿命且维持分离度和效率。柱子开始使用时全流速使用可以压紧填料并且在进口处产生空白，这将降低柱效。 当柱子首次与HPLC系统相连时，在缓慢运转后的正常流速下操作时需检查