Nrf2与非小细胞肺癌放射敏感性以及氧化应激耐受的研究3.doc

题目： Nrf2与非小细胞肺癌放射敏感性以及氧化应激耐受的研究 立题依据： 研究意义 由于全球污染严重以及吸烟者众多，非小细胞肺癌已成为各发达国家常见的恶性肿瘤之一。我国肺癌发生率的发病率和病死率逐年上升，已远远超过肝癌、乳腺癌等恶性肿瘤居于榜首。 放射疗法是目前治疗局部晚期非小细胞肺癌（non-smallcell lung cancer，NSCLC）的主要治疗手段，但局部晚期 NSCLC 患者的 5 年生存率不足 15%，其主要失败原因之一是局部未控。肿瘤细胞放射敏感性是影响放疗疗效的主要因素，美国南加州大学必威体育精装版研究表明保护癌症和其他细胞免受应激压力的一种蛋白质有一天能够帮助医生打破癌细胞的防御能力，使得癌细胞对相应治疗更敏感Nrf2是一种转录因子蛋白质，Davies实验室的研究工作表明在氧化应激过程中，蛋白酶和蛋白酶体调节因子（PA28）的生成是由Nrf2控制的。反过来，蛋白酶是一个大的蛋白质酶，能分解氧化的蛋白，氧化的蛋白积累的话会导致细胞死亡。在正常细胞中，Nrf2允许蛋白酶连续生成以应对不断变化的氧化环境。降低癌细胞中Nrf2的表达，癌细胞的抗应激能力下降，更容易死于放疗Akt激酶的蛋白表达水平及磷酸化水平，研究Nrf2阻断剂能否抑制NO/eNOS、PI3K/Akt促增殖信号通路。 检测上述细胞内P38 MAPK激酶的蛋白表达及磷酸化水平，研究Nrf2阻断剂能否激活ERK/P38MAPK/JNK凋亡信号通路。 四、创新点： 1、研究Nrf 2蛋白表达水平与非小细胞肺癌放射敏感性的关系，将现代分子生物学与放射医学有机的结合起来，将临床放射治疗肺癌的研究推到分子细胞层次，有望以此作为增强肺癌放射敏感性的作用靶点，为相关新药的研究与开发提供了实验依据。 2、为开发出能够增强非小细胞肺癌放射治疗疗效的新药提供新的候选靶点；揭示Nrf2增强肺癌细胞放射敏感性的深层分子机制。 3、建立临床放射治疗疗效研究的细胞生物学研究方法。 五、研究方法： A549的培养：采用RM1640培养原液，10%的小牛血清，37度CO2培养箱进行常规培养； 细胞存活率的检测：MTT法； 细胞周期检测：PI标记细胞内DNA，激光流式细胞仪检测； 细胞凋亡率检测：Annexin V-FITC+PI双重标记，流式细胞仪检测； 蛋白表达水平检测： A：免疫荧光标记+激光共聚焦显微镜检测。B: Western blot. 六、技术路线（见下图） 七、预期成果： 1、发现Nrf2对非小细胞肺癌细胞A549增殖、生存的调节作用及其作用靶点，揭示Nrf2与非小细胞肺癌放射敏感性的关系。 2、为开发出能够增强非小细胞肺癌放射治疗疗效的新药提供新的候选靶点； 3、建立临床疗效研究的细胞生物学研究方法。 4、在核心期刊上发表论文3~5篇。 技术路线： 为开发出能够增强非小细胞肺癌放射治疗疗效的新药提供新的候选靶点；揭示Nrf2增强肺癌细胞放射敏感性的深层分子机制。 研究Nrf2能否抑制细胞内NO/eNOS、PI3K/Akt促增殖信号通路 研究Nrf2与细胞内异常的细胞氧胁迫状态间的关系； 研究Nrf2能否激活细胞内ERK/P38MAPK/JNK凋亡信号通路 检测细胞ROS、SOD、GSH水平及P38MAPK 检测细胞内NO水平，eNOS、Akt的蛋白表达水平及磷酸化水平(活性高低)。 明确Nrf2与非小细胞肺癌放射敏感性的关系 流式细胞仪测定细胞周期、细胞凋亡率 MTT法检测其增殖率，绘制细胞增殖曲线 倒置相差显微镜观察细胞生长状态 X射线+Nrf2阻断断剂 正常对照组 X射线组 A549 模型组基础上添加Nrf2阻断剂培养 正常培养液培养 用 5 Gy X射线照射处理