siRNA沉默Akt1基因的表达及其对脐静脉内皮细胞增.PDF

· 36 · 华南国防医学杂志 2009年第 23卷 第 1期 siRNA沉默 Aktl基因的表达及其对脐静脉 内皮细胞增殖 的抑制作用 涂明利 罗 强 熊 畅 刘先军 郑红梅 张 晶 刘玉全 罗国仕 【摘要】 目的 筛选Aktl基因特异性小干扰 RNA(smallinterferenceRNA ，siRNA)，观察 siRNA对血管内皮细 胞Aktl基因表达及增殖的影响。方法 人脐静脉 内皮细胞 (humanumbilicalveinsendothelialcells，HUVECs)为靶细 胞，设计、筛选和合成3对针对Aktl基因mRNA的siRNA(AktlsiRNA-1、AktlsiRNA-2和AktlsiRNA-3)，利用阳离子 脂质体介导转染HUVECs。分 3组 ：仅加脂质体 (Lip组)；加 ScramblesiRNA组 (Scr组)．力口AktlsiRNA组 (Aktl组)。 采用半定量 RT_PCR技术检测 AktlmRNA和Akt2mRNA 的表达，用 westernblot技术检测 Akt总蛋 白表达。用 H— TdR掺人实验和流式细胞仪检测 HUVECs的DNA合成和增殖指数。结果 筛选出的AktlsiRNA-1转染后 24h细胞 AktlrnRNA表达水平明显下调 (分别与Lip组、Scr组相 比，均为PG0．O1)，且对Akt2表达没有影响。AktlsiRNA-1转 染后 48h，明显抑制了总Akt蛋 白的表达 (分别与Lip组、Scr组相 比，均为PG0．05)。转染AktlsiRNA-1组 H—TdR掺 入量和增殖指数显著降低 (分别与Lip组、Scr组相比，均为PG0．)【1)。结论 特异性 siRNA能够有效的抑制Aktl基 因的表达，并明显抑制血管内皮细胞的增殖。 关 键 词 RNA干扰 基 因 Aktl 内皮细胞 增殖 中图分类号 R394 文献标识码 A InhibitoryEffectofSiRNA onExpressionofAktlandProliferationofUmbilicalVeinsEndothelialCells TUMing-li，LUOQiang，XIONGChang，eta1．DepartmentofRespiratoryMedicine， eAffiliatedTaiheHospi— tal，YunyangMedicalCollege，S矗iyanHubei442000，China [Abstract] Objective ToselectsmallinterferenceRNAs(siRNAs)targetingAktlandtOobserveitseffectonex- pressionofAktlandproliferationofhuman umbilica1veinsendothelialcells(HUVECs)．Methods ThreesiRNA se— quencesspecificallytargetingAktl(namedassiAktl，siAkt2andsiAkt3)wereconstructedandchemicallysynthesized， andthebestonewastransfectedintoHUVECswithLipofectamineI 2000．TheexpressionofAktl—mRNA wasexamined byreversetranscriptasepolymerasechainreaction (RT PCR)，andtheexpressionlevelofAktproteinwascheckedby westernblotanalysis．TheDNA synthesiswasdeterminedby H TdR incorporationandflow eytometry．Sc ramblesiR— NA transfectedandnon-transfectedHUVECSservedascontro1．Reslllts HUVECStransfectedwithsiAktlhadsig