测量不确定度评估报告-2015417氯霉素.docx

测量不确定度评定报告DCWD-CX5.4-04-01实验目的使用GB/T20756-2006方法对样品进行前处理，使用液质联用仪测定样品溶液中氯霉素类的含量，从而定量样品中氯霉素的残留量。对测定的不确定度进行分析，找出影响其不确定度的因素，对不确定度进行评估，如实反映测量的置信度和准确性。材料与方法2.1 仪器与试剂液质联用仪：设备编号H067，型号Agilent1260-6460A离心机：设备编号H109，型号L-550，最大转速4000r/min电子天平：设备编号H102，型号AL204，最小分度值0.0001g震荡器：设备编号H047，型号HY-4移液器：50μl、200μl、1000μl移液管：10mL试剂：乙酸乙酯（色谱纯）、氨水（优级纯）、超纯水、正己烷（色谱纯）2.2方法依据和步骤GB/T20756-2006 可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定 液相色谱-串联质谱法提取①称取 5g（±0.05g）试样，置于 50ml 离心管中；②加入 15ml 乙酸乙酯，0.45ml 氢氧化铵，5g 无水硫酸钠，均质提取 30s，以 3500rpm 离心 5min；③吸取上清液于 250ml 旋转蒸发瓶中；④在残渣中加入 15ml 乙酸乙酯，0.45ml 氢氧化铵，用先前的均质刀头均质提取 30s，以 3500rpm 离心5min；⑤吸取上清液合并于 250ml 旋转蒸发瓶中；⑥再重复上述操作 2 次（共 4 次），合并全部全部上清至 250ml 旋转蒸发瓶中；⑦40℃旋转浓缩至干。净化①旋转蒸发瓶中的残渣用 5ml 水溶解，含有不溶物时，超声 5min；②加入 5ml 正己烷，于漩涡混合器混合 30s；③静置（或离心）分层，弃掉上层的正己烷；④再加入 5ml 正己烷漩涡混合 30s ，静置（或离心）分层，弃掉上层；⑤移取水层约 3ml 于 5ml 离心管中，以 13000rpm 离心 5min；⑥0.20μ m 针头过滤器过滤后，供 LC/MS/MS 测定，外标法定量，检测结果使用回收率进行校正。3 计算公式和数学模型食品中氯霉素的含量按下述公式计算w==== （1）w — 样品中氯霉素的含量，μg/kg；Cs — 样品最终测定的浓度，μg/kg；V — 旋转浓缩至干后溶解用水的体积；m — 称取试料的质量， g；x — 由标准曲线求得样液中氯霉素和内标D-5氯霉素的浓度比；cIS— 样液中内标的浓度，ng/mL；y — 氯霉素和内标的峰面积之比；a — 斜率；b — 截距；—内标工作液的浓度，ng/mL；V’ —加入样品中内标工作液的体积，mL 4 合成标准不确定度和各分量灵敏系数根据式（1），样品中氯霉素含量测定的合成标准不确定度按式（2）计算：u(w)=[c2(y)u2(y)+c2(a)u2(a)+ c2(b)u2(b)+ c2()u2()+c2(V’)u2(V’)+ c2(m)u2(m)]1/2 (2)各分量灵敏度系数按式（3）计算：c（y）=； c（a）=-； c（b）= -；c（）=；c（V）=；c（m）= -； （3）5、标准不确定度评估5.1氯霉素和内标峰面积之比的不确定度u(y)样液中氯霉素和内标峰面积之比通过实验可以直接读取，与线性回归无关，其不确定度主要来源于实验过程中方法精密度、人员操作、试剂、污染因子和损失因子等所导致的峰面积之比的变动性。由此可见，不确定度u（y）以A类评定为主，B类为辅，根据实验方法测定n个平行样品，得到n个仪器响应值ym,i(i=1,2, ????????n)。对n次平行实验结果进行统计运算，其标准偏差s(y)作为不确定度u(y)，包含了以上变动性所导致的不确定度。u(y)=s(y)= （4）式中：实验中，测定了6个平行样品，实验数据及计算结果见表1。表1 平行实验数据及计算结果s(y)0.1；0.1；0.11；0.11；0.11；0.110.1；0.1；0.1；0.10.1011.79×10-3将表1数据代入式（4），计算得：u(y)= 1.79×10-35.2斜率a及截距b的标准不确定度u(a)、u(b) 上述的数学模型是在假设回归方程为y=ax+b前提下建立。斜率和截距的不确定度主要包括由每个实验点的不确定度和实验点相对最佳拟合直线的分散性所引起的不确定度。对于每一个xi(i=1,2,…N)平行测定j次得到yi,j(j=1,2,……M),回归方程的斜率、截距可近似按如下计算{6}：首先由回归方程得到的yi=axi+b与相应yi,j之差按贝赛尔公式求出其标准差s（yi）S(yi) = （5）式中：- 仪器上所得被测物与内标峰面积之比；- 对应xi的回归方程计算值；N – 测量点数M –测量点重复次数。由式（6）、（7）得到a、b的不确定度