测定生物试样中微量硒的方法研究.doc

氢化物发生-物色散原子荧光 测定生物试样中微量硒的方法研究 ? 梁兢波? 李道旺? 杨健? 阮永华? 施周文 ?????? ?? 摘要　?g /L范围内时与荧光强度呈良好的线性关系(r=0.9999)，检出限达 0.47?g/L，样品加标回收率为 101.8%，测定结果与催化极谱法对照也获得了很好的一致性(P0.20)。实验操作简单、快速方便可以在卫生检验及其他领域中用于生物样品中准确测定ng/g级的微量硒。 ? 关键词? 硒　氢化物　原子荧光　压力消化罐 ? 硒是人体代谢过程必不可少的微量元素之一，是谷胱甘肽过氧化物酶的重要组成部分，在医学领域有着十分重要的生物学意义，人体摄入硒的不足或过量都会影响健康，所以食物、饮水及人体内微量硒的准确测定为医学界所重视。一般常用的硒测定方法有比色法、气相色谱法、原子吸收法、荧光法、极谱法等，由于比色法缺陷较多几乎已不被应用；其它几种方法各有长短，但共同的不足之处是操作繁杂、效率较低[1]。本文利用北京地质仪器厂研制的 XDY-2A型原子荧光光度计，用单纯形优化法[2]选择最佳工作条件，用聚四氟乙烯压力消化罐或普通湿法消化作试样前处理，建立了氢化物发生－无色散原子荧光(HG-AFS)测定生物样品中微量硒的方法，使之在生物样品分析测定领域获得成功应用。同时采用催化极谱法作对照测定，取得了一致的测定结果(P 0.20)。HG-AFS法测定生物试样中微量硒有很好的精密度和准确度，且操作简单、快速方便，可以广泛应用于医药卫生领域作各类检材中微量硒的测定。也适用于富硒食品资源开发工作中的硒含量测定之用。 ?? ?1 　　1.1.XDY-2A型双道无色散原子荧光光度计/286电子计算机控制处理系统(北京地质仪器厂) 　　1.2.钢瓶氩气 99.99% (咸阳彩虹显像管厂) 　　1.3.MP-1型溶出分析仪 (山东电讯七厂) ??? 1.4.聚四氟乙烯压力消化罐(北京分析仪器配件厂) ??? 1.5.电热恒温烤箱；可调温电炉 　　1.6.硝酸、高氯酸、盐酸、30%双氧水(均为AR级) 1.7.0.4%铁溶液：称取优级纯铁粉2g，加热溶解于 30ml浓盐酸中，加水定容至500ml。 1.8.0.7%硼氢化钾溶液：称取3.5g硼氢化钾，溶于500ml含有1g氢氧化钠的水中(临用时新配)。 　　1.9.硒标准溶液：称取光谱纯元素硒0.1000g，溶于少量硝酸中，加高氯酸 5ml、盐酸 10ml，沸水浴加热15分钟，定容至 1000ml。此液含Se 100mg/L，临用时再逐级稀释为1-100?g/L的标准系列。 ?? ?2 ??? 2.1 样品处理? 被测样品经 90℃恒温干燥、用小型植物粉碎机粉碎过 80目筛，瓶装置干燥器中待检。本文使用了两种不同的样品消化方法可分别采用： ??? 2.1.2 准确称取待检样品 0.4g置消化器聚四氟乙烯内筒中， 加硝酸1ml加盖静置过夜，翌日再加 4ml 30%双氧水，套上不锈钢外套将盖子宁紧。将消化罐置烤箱中逐步升温至 130℃时恒温保持 2小时，取出令自然冷却后打开罐盖取出内筒，其中样品呈无色或淡黄色清亮溶液，加入 2.5ml盐酸，再置沸水浴中加热20分钟，冷却后转移至 10ml比色管再加 0.5ml高氯酸和 0.5mlFe(Ⅲ)溶液，定容待测。 　　2.1.1 准确称取待检样品1g置消化瓶中，加硝酸10ml静置过夜，翌日于电炉上小火消化至淡黄色，冷却后加高氯酸 5ml，继续消化并升高电炉温度使冒出大量白烟、以瓶颈仍有少量白烟为度。稍冷再加水 2ml继续消化至瓶颈处白烟将尽即可。转移至 25ml比色管中，定容。吸取样品溶液 5.0ml于10ml比色管中，加 2.5ml盐酸后于沸水浴中加热 20分钟，取出冷却再加 0.5ml Fe(Ⅲ)溶液，定容待测。 2.2 原子荧光光度仪条件选择与测定 2.2.1 石英炉原子化器温度的调节：由于与仪器联机的电子计算机所示的炉温为相对电压信号，不同炉子之间无可比性，故本实验采用逐步升温至刚能点着火为选定炉温，以后使用同一炉子时参考计算机显示的电压信号设定之。 ??? 2.2.2 其余条件用单纯形优化法选择，经用计算机编程统计处理，选定荧光强度较大的条件组合：灯电流 95mA；负高压 400V；载气流量 600ml/min；屏蔽气流量 800ml/min；炉高 7.5mm；硼氢化钾加入量 3ml (经计算机用加液时间控制)；测量时间 13s、延时 1s；计算机读取峰面积积分信号。 　　2.2.3 测定：吸取待测液 2ml置氢化物发生瓶中，加塞后按动测量加液键，硼氢化钾溶液自动加入，反应生成的硒化氢被载气带入石英炉燃烧而原子化，产生的荧光信号由计算机读取与标准系列比较，经程序统计处理得结果。 ??? 2.3 催化极谱法测定操作参考文献[